朱梦瑜1,高星杰1,钱宝鑫1,杨洁2
摘要: 目的:将人类G3BP(Ras-GTPase Activating Protein SH3 Domain Binding Protein)蛋白Domain(1~5)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使G3BP蛋白各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRI和BamHI双酶切法将目的片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1~5)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。 结论:重组pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1~5)质粒成功构建并表达。