赵家宁1,徐宝山2,曾超1,杨强3,马信龙2,张春秋4,李秀兰5,张扬2
ZHAO Jia ning1,XU Bao shan2,ZENG Chao 1,YANG Qiang 3,MA Xin long2,ZHANG Chun qiu4,LI Xiu lan2,ZHANG Yang 2
摘要:
【摘要】 目的 探讨新型丝素蛋白多孔支架复合经 PKH26 标记的兔髓核细胞初步构建组织工程髓核的可行性。 方法 消化分离兔髓核细胞, 培养获取 P1 代细胞, 对 P1 代髓核细胞行番红 O 以及Ⅱ 型胶原免疫组织化学染色; PKH26 标记兔髓核细胞, MTT 法检测标记前后髓核细胞增殖情况, 将标记后的细胞接种支架, 体外培养 4 d 后,将细胞-支架复合物植入裸鼠皮下, 体内培养 12 周后, 进行活体荧光成像技术检测、HE 染色、甲苯胺蓝染色、番红 O染色和Ⅱ 型胶原免疫组化染色。 结果 P1 代髓核细胞番红 O 染色阳性, Ⅱ 型胶原免疫组织化学染色阳性; 标记后细胞荧光强度分布均匀, 标记前后髓核细胞光密度(OD)值比较差异无统计学意义(P > 0.05); 活体成像技术显示裸鼠皮下植入的细胞-支架复合体呈现强烈荧光; HE 染色见多孔支架内壁有大量髓核细胞填满并分泌大量细胞外基质; 甲苯胺蓝染色、番红 O 染色及Ⅱ 型胶原免疫组化染色均呈阳性, 细胞周围大量细胞外基质分泌。 结论 以新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞经体内培养形成的类髓核样组织, 可用于组织工程化髓核的构建。