杜红阳
Hongyang DU
摘要: 目的 构建Notch1(NICD)过表达真核载体,探讨其对大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenehymal stem cells,BMSCs)增殖分化的影响。方法 以大鼠BMSCs为研究对象,构建Notch1(NICD)过表达真核载体,将pEGFP-N1-NICD质粒转染BMSCs,实验分为空白对照CON组、空载体组和转染组,转染48h后观察细胞一般形态,Realtime PCR和Western blotting检测NSE、GFAP 和Notch1基因和蛋白表达,流式检测转染后细胞凋亡和细胞周期情况;MTT检测增殖情况。结果 经DNA测序结果,重组质粒pEGFP-N1-NICD编码序列与设计完全一致,转染48h后转染组和空载体组的BMSCs均可表达绿色荧光。转染组Notch1、GFAP基因相对表达量显著高于空载体组和CON组(P<0.05),Western blotting检测结果与之类似。转染48h后,转染组活细胞比率及早期凋亡率、晚期凋亡率与CON组和空载体组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);空载体组与CON组晚期凋亡率比较差异具有统计学意义(P<0.05),转染组细胞处于G1/G0细胞比例显著高于CON组和空载体组(P<0.01),而处于S和G2/M期细胞比例显著低于CON组和空载体组(P<0.01),转染组增殖曲线值随时间逐渐低于CON组和空载体组,到第4d时显著低于CON组和空载体组(P<0.05)。结论Notch1(NICD)过表达真核载体构建成功,高表达Notch1(NICD)基因可能在一定程度上诱导BMSCs凋亡、抑制其增殖,且表现诱导向神经胶质样细胞分化。