天津医药

天津医药 ›› 2017, Vol. 45 ›› Issue (2): 146-150.doi: 10.11958/20161302

• 细胞与分子生物学 • 上一篇    下一篇

可溶性 GST-CRH 蛋白原核表达条件的优化及纯化

郁硕 1， 陈锋 2， 刘英富 3， 霍景瑞 2， 李光宗 2， 张益 2， 丁辉 2， 樊毫军 1△   

  1. 1 河南新乡医学院附属医院呼吸内科 （邮编 453000）； 2 武警后勤学院附属医院救援医学研究所； 3 武警后勤学院细胞生物学教研室
  • 收稿日期:2016-11-08 修回日期:2017-01-16 出版日期:2017-02-15 发布日期:2017-02-14
  • 通讯作者: △通讯作者 E-mail：fanhaojun999@163.com E-mail:978801515@qq.com
  • 作者简介:郁硕 （1988）， 男， 硕士， 住院医师， 主要从事呼吸与危重症专业方面的研究
  • 基金资助:
    天津市科技计划项目（14ZCDZSY00033）； 全军重点实验室开放基金（JY1402）； 武警后勤学院附属医院科研平台开放基金（WYFKFM201602、 WYKFZ201603）

Optimization of prokaryotic expression condition and purification of soluble GST-CRH protein

YU Shuo1, CHEN Feng2, LIU Ying-fu3, HUO Jing-rui2, LI Guang-zong2, ZHANG Yi2, DING Hui2, FAN Hao-jun1△   

  1. 1 Respiratory Department, the Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Henan 453000, China; 2 Institute for Disaster and Emergency Rescue Medicine, the Affiliated Hospital of Logistics University of Chinese People’ s Armed Police Force; 3 Department of Cell Biology, Logistics University of Chinese People’ s Armed Police Force
  • Received:2016-11-08 Revised:2017-01-16 Published:2017-02-15 Online:2017-02-14
  • Contact: △Corresponding Author E-mail: fanhaojun999@126.com E-mail:978801515@qq.com

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摘要： 目的 通过谷胱甘肽巯基转移酶 （GST） -促肾上腺皮质激素释放激素 （CRH） 原核表达条件的优化及纯化，获得可溶性好、 纯度高的重组 GST-CRH 蛋白。方法 通过对 GST-CRH 转化菌表达温度、 菌液密度（OD600）、 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 （IPTG） 浓度以及诱导时间的摸索， 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS-PAGE） 检测可溶性 GST-CRH 蛋白的表达情况， GST 琼脂糖凝胶进行 GST-CRH 的纯化， Western Blot 对表达的目的蛋白进一步鉴定。结果 起始 OD600 0.8、 IPTG 工作浓度 0.1 mmol/L、 30 ℃诱导 8 h 为 GST-CRH 最优诱导条件； 融合蛋白经 Western Blot 鉴定为表达的 GST-CRH， 纯化后纯度＞95%。结论 建立了 GST-CRH 的原核表达及纯化方法， 获得了高纯度的 GST-CRH 可溶性蛋白。

关键词: 促肾上腺皮质素释放激素, 谷胱甘肽巯基转移酶, 原核表达, 纯化

Abstract: Objective To obtain the recombinant corticotropin releasing hormone (CRH) protein with soluble, high purity protein through optimizing prokaryotic expression condition and purifying glutathione thiol transferase (GST)-CRH protein. Methods To detect the expression of soluble CRH protein through grope of the host strain GST-CRH temperature of induction expression, the host strain concentration (OD600), IPTG concentration and induction time, the purification of GST-CRH was performed by GST-CRH agarose gel. Western Blot assay was used for the expression identification of the target protein. Results The optimal conditions for the induction of CRH protein were determined: temperature of 30 ℃, IPTG induced concentration 0.1 mmol/L, bacteria density (OD600) 0.8, the induction time of 8 hours, purified GST-CRH > 95% fusion protein was obtained. Conclusion The optimal expression conditions of GST- CRH are obtained, and the soluble protein of high purity GST-CRH is also obtained.

Key words: corticotropin-releasing hormone, glutathione s-transferase, prokaryotic expression, purification