天津医药 ›› 2017, Vol. 45 ›› Issue (10): 1029-1032.doi: 10.11958/20170572
李波,宗军,白广超,金洪亮,雷堃,李宽新
LI Bo, ZONG Jun, BAI Guang-chao, JIN Hong-liang, LEI Kun, LI Kuan-xin
摘要: 目的 研究动态压力刺激对体外培养的大鼠干骺端软骨细胞 Sox9 mRNA 及蛋白表达水平的影响,探讨动 态压力信号转导的可能机制。方法 体外分离培养的大鼠干骺端软骨细胞培养至第 3 代时随机分为 4 组:对照组, 所有干预措施均不施加;单纯动态压力组,采用开放式压力控制培养系统施加大小为 90 mmHg、频率为 0.1 Hz 的动 态压力刺激;单纯钙离子拮抗剂组,施加浓度为 10 μmol/L 硝苯地平干预;动态压力+钙离子拮抗剂组,同时进行 90 mmHg、0.1 Hz 的动态压力刺激和浓度为 10 μmol/L 硝苯地平干预。干预 24 h 后进行实时定量 PCR 检测各组细胞 Sox9 mRNA 表达情况,Western blot 检测各组细胞 Sox9 蛋白表达情况。以 Fluo-3/AM 标记干骺端软骨细胞内游离 Ca2+,激光共聚焦扫描显微镜扫描并比较各组细胞平均荧光强度。结果 实时定量 PCR 结果显示,单纯动态压力组 细胞内 Sox9 mRNA 平均表达水平是对照组细胞的 3.81 倍,蛋白表达水平是对照组细胞的 2.33 倍(P<0.05);单纯钙 离子拮抗剂组细胞 Sox9 mRNA 表达量和蛋白表达量与对照组差异无统计学意义;动态压力+钙离子拮抗剂组细胞 Sox9 mRNA 表达量和蛋白表达量均较单纯动态压力组低,但均较对照组升高(P<0.05)。各组细胞平均荧光强度结 果表明各组细胞内游离 Ca2+浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论 动态压力刺激可以增加大鼠干骺端软骨细胞 Sox9 mRNA 及蛋白的表达,且在该力学信号转导中有钙离子通道的参与。