罗远材1,瞿全新2,糜若然3,4
摘要: 摘要 目的:构建含有靶向人乳头瘤状病毒18亚型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体。方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连入pGCSIL-GFP质粒,构建含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA并鉴定;将重组质粒pGC-shRNA和病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T 细胞,进行病毒包装,收集病毒液并进行浓缩、纯化;所得病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度。结果:经同源性检索及对转录后得到的RNA进行二级结构预测,HPV18E6的shRNA干扰序列与人类基因组没有同源性,此插入序列转录后得到的RNA二级结构能形成发夹状结构;重组质粒pGC-shRNA经PCR鉴定及DNA测序结果显示该重组质粒构建成功;成功对病毒进行包装、浓缩及纯化后,所得病毒滴度为3x108TU/ml。结论:成功构建了HPV18E6-RNAi-LV慢病毒载体,为后续RNA干扰实验的开展提供了有力的工具。