天津医药 ›› 2016, Vol. 44 ›› Issue (12): 1423-1427.doi: 10.11958/20160592
徐鹏育， 李家印， 苗亚静， 高翠翠， 沈尧， 靳芳， 仇晓菲△
XU Pengyu, LI Jiayin, MIAO Yajing, GAO Cuicui, SHEN Yao, JIN Fang, QIU Xiaofei △
摘要： 摘要： 目的 观察谷氨酰胺 （Gln） 对小细胞肺癌 H446 细胞增殖和生存的影响， 并探究其机制。方法 应用 CCK-8 试剂盒检测 Gln （+） 组和 Gln （-） 组 H446 细胞在 0、 24、 48、 72、 96 h 的增殖情况， 筛选出最佳时间， 采用 Annexin V-FITC/PI 双染法、 CellTiter-Glo®发光法和流式细胞仪分别检测这 2 组细胞的存活比例、 三磷酸腺苷 （ATP）和活性氧 （ROS） 水平； 以 Gln （-） 组为对照组， 实验组中加入草酰乙酸 （OAA） 或 α-酮戊二酸二甲酯 （DM-αKG）， 检测各组 H446 细胞的 ATP 水平、 增殖和存活情况； 以 Gln （-） 组为对照组， 实验组中加入 ROS 清除剂 N-乙酰-L-半胱氨酸 （NAC）， 检测 2 组细胞的 ROS 水平、 增殖、 克隆和存活情况； 在 Gln （+） 条件下， 用 0、 2、 5、 10 μmol/L 谷氨酰胺酶抑制剂 BPTES 处理 H446 细胞， 通过克隆实验筛选最佳作用浓度， 在此浓度下检测 Gln （+） 组和 Gln （+） +BPTES 组细胞的 ATP、 ROS 水平和增殖水平。最后， 单独应用 BPTES 或 ROS 诱导剂过氧化氢 （H2O2 ） 和二者联合应用情况下检测细胞的存活比例。结果 相比 Gln （+） 组， Gln （-） 组 H446 细胞的增殖水平在 24、 48、 72、 96 h 均降低 （P＜0.05）， 72 h 降低最明显， 取 72 h 为最佳时间； Gln （-） 组细胞的存活比例和 ATP 水平低于 Gln （+） 组 （P＜0.05）， ROS 水平高于 Gln （+） 组； 相比 Gln （-） 组， Gln （-） +OAA 组和 Gln （-） +DM-αKG 组 H446 细胞的 ATP 和增殖未升高， 而存活比例升高（P＜0.05）； 相比 Gln （-） 组， Gln （-） +NAC 组 ROS 水平降低， 增殖、 克隆水平和存活比例均升高 （均 P＜0.05）。克隆实验结果显示 10 μmol/L BPTES 为最佳浓度； 相比 Gln （+） 组， Gln （+） +BPTES 组细胞的 ATP 和增殖降低 （均 P＜0.05）， ROS 水平升高； 相比单独应用， BPTES+H2O2 组 H446 细胞存活比例明显降低。结论 Gln 缺乏可通过提高 ROS 水平抑制H446细胞的增殖和生存； BPTES 和H2O2对 H446 细胞有联合杀伤作用。
