天津医药 ›› 2017, Vol. 45 ›› Issue (12): 1237-1241.doi: 10.11958/20170819
张晓宇 1, 康晓宁 2, 刘伟 1, 刘志明 1, 王鹏 1, 王遵义 1△
ZHANG Xiao-yu1, KANG Xiao-ning2, LIU Wei1, LIU Zhi-ming1, WANG Peng1, WANG Zun-yi1△
摘要: 目的 构建 FOS 样抗原 1(FOSL1)基因沉默的载体, 研究 FOSL1 对人乳腺癌细胞系 MDA-MB-231 增殖 和侵袭的影响, 以及对此细胞中 PRDM10 基因的甲基化状态的影响。方法 FOSL1 沉默的 pLVX-shRNA-FOSL1- shRNA 干扰质粒载体, 采用慢病毒感染法分别用 pLVX-shRNA-FOSL1-shRNA 载体以及 pLVX-shRNA 空载的两种 病毒感染靶细胞 MDA-MB-231, 分别记作转染组和空载组。以未转染的 MDA-MB-231 作为对照组。RT-PCR 验证 FOSL1 表达后, 分别采用 MTT 实验和 Transwell 实验检测 MDA-MB-231 的细胞增殖能力和侵袭能力。采用 MSP 法 检测 PRDM10 基因的甲基化状态。Q-PCR 和 Western blot 分别检测 PRDM10 的 mRNA 和蛋白质表达水平。结果 MTT 实验显示, 24 h、 48 h 和 72 h 时, 转染组 MDA-MB-231 的 OD 值低于对照组 (均 P<0.05); 48 h 和 72 h 时, 转染 组 MDA-MB-231 的 OD 值低于空载组 (均 P < 0.05)。Transwell 实验显示, 与空载组和对照组相比, 转染组的 MDAMB-231 细胞侵袭能力降低 (均 P < 0.05)。MSP 实验显示, 与空载组和对照组相比, 转染组的 MDA-MB-231 细胞中 PRDM10 基因甲基化水平降低。Q-PCR 和 Western blot 实验显示, 与空载组和对照组相比, 转染组 PRDM10 的 mRNA 和蛋白质表达水平均升高。结论 FOSL1 基因沉默抑制 MDA-MB-231 细胞的增殖和侵袭, 可能与该细胞中 PRDM10 基因的去甲基化有关。