FOXO3a 调控线粒体自噬在肝脏缺血再灌注
损伤中的作用
宋虎 1, 张建军 2△, 王振 2, 杜晨阳 1, 郑虹 2, 沈中阳 2
2017, 45 (12):
1242-1247.
doi: 10.11958/20170865
摘要
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目的 探讨转录因子 FOXO3a 调控线粒体自噬对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法 雄性 C57BL/6
小鼠 30 只, 随机分为 Sham 组 (只模拟开腹手术不夹闭) 和再灌注 (IR) 2、 6、 12、 24 h 组, 每组 6 只, 建立小鼠肝缺血再
灌注损伤模型。血生化检测各组丙氨酸转氨酶(ALT)、 天冬氨酸转氨酶(AST)变化, HE 染色及 TUNEL 法观察肝组
织损伤及细胞凋亡情况, Western blot 及 qRT-PCR 检测各组细胞中转录因子 FOXO3a、 线粒体自噬相关蛋白 Nix 蛋
白及其 mRNA 表达水平。培养小鼠肝 AML12 细胞, 用 FOXO3a 和 Nix 干扰 RNA 处理细胞建立缺氧 1.5 h 复氧 6 h
的模型, 分为 siRNA-NC 组(加入 10 μL siRNA 空载对照转染细胞)、 FOXO3a siRNA 组(加入 10 μL FOXO3a siRNA
转染细胞)以及 Nix siRNA 组(加入 10 μL Nix siRNA 转染细胞)。MTT 法检测各组细胞活力, 共聚焦显微镜观察各
组细胞内自噬体的数量与分布, Western blot 检测 FOXO3a、 Nix、 微管相关蛋白 LC3、 凋亡蛋白 P62 及 Caspase-3 的表
达情况。结果 IR 各组 ALT、 AST 均明显升高, 且再灌注 6 h 时达到峰值(P<0.05)。HE 及 TUNEL 结果示再灌注
6 h 时小鼠肝组织损伤以及细胞凋亡最严重。IR 各组 FOXO3a 及 Nix 的 mRNA 相对表达量均高于 Sham 组, 且再灌
注 12 h 时 FOXO3a 的 mRNA 表达量最高, 再灌注 6 h 时 Nix 的 mRNA 表达量最高(P<0.05)。Western blot 示再灌
注 12 h 时 FOXO3a 相对表达水平最高, 再灌注 6 h 时 Nix、 Caspase-3、 LC3Ⅱ相对表达水平最高。干扰 FOXO3a 的表
达后, MTT 显示 FOXO3a siRNA 组细胞存活率降低(P<0.05); Western blot 检测显示 siRNA-NC 组 FOXO3a 表达水
平高于 FOXO3a siRNA 组, Nix、 Caspase-3、 LC3Ⅱ表达水平明显低于 FOXO3a siRNA 组 (P<0.05)。共聚焦显微镜观
察示 siRNA-NC 组细胞内自噬体的数量低于 FOXO3a siRNA 组。干扰 Nix 的表达后, MTT 显示 Nix siRNA 组细胞存
活率升高 (P<0.05); Western blot 检测显示 siRNA-NC 组 Nix、 P62、 LC3Ⅱ表达水平高于 Nix siRNA 组, 而 FOXO3a 表
达水平低于 Nix siRNA 组 (P<0.05)。结论 FOXO3a 可减轻小鼠肝缺血再灌注损伤, 其机制可能与 FOXO3a 抑制肝
细胞线粒体自噬且抑制细胞凋亡有关。
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