八珍汤合白术附子汤对多囊卵巢综合征大鼠糖代谢及雌激素水平的调节作用

doi:10.11958/20230549

天津医药 ›› 2024, Vol. 52 ›› Issue (2): 154-160.doi: 10.11958/20230549

八珍汤合白术附子汤对多囊卵巢综合征大鼠糖代谢及雌激素水平的调节作用

陈俊杰(), 许雪梅^△(), 李岩, 傅金英

河南省中医院妇产科（邮编450002）

收稿日期:2023-04-17 修回日期:2023-05-06 出版日期:2024-02-15 发布日期:2024-01-26
通讯作者: ^△ E-mail：hnszyyxxm@126.com
作者简介:陈俊杰（1982），女，主治医师，主要从事生殖内分泌方面研究。E-mail：awarqa@163.com
基金资助:
河南省科技攻关计划项目(202102110015)

Effects of Bazhen Decoction combined with Baizhu Fuzi Decoction on glucose metabolism and estrogen levels in rats with polycystic ovary syndrome

CHEN Junjie(), XU Xuemei^△(), LI Yan, FU Jinying

Department of Obstetrics and Gynecology, Henan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450002, China

Received:2023-04-17 Revised:2023-05-06 Published:2024-02-15 Online:2024-01-26
Contact: ^△ E-mail：hnszyyxxm@126.com

陈俊杰, 许雪梅, 李岩, 傅金英. 八珍汤合白术附子汤对多囊卵巢综合征大鼠糖代谢及雌激素水平的调节作用[J]. 天津医药, 2024, 52(2): 154-160.

CHEN Junjie, XU Xuemei, LI Yan, FU Jinying. Effects of Bazhen Decoction combined with Baizhu Fuzi Decoction on glucose metabolism and estrogen levels in rats with polycystic ovary syndrome[J]. Tianjin Medical Journal, 2024, 52(2): 154-160.

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨八珍汤合白术附子汤对多囊卵巢综合征大鼠糖代谢及雌激素水平的调节作用。方法采用皮下注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）联合胰岛素方法建立多囊卵巢综合征大鼠模型，随机分为多囊卵巢综合征组、白术附子汤组（6.4 g/kg）、八珍汤组（9.2 g/kg）、八珍汤合白术附子汤组（11.55 g/kg）及己烯雌酚组（0.5 mg/kg），另设空白对照组（未造模大鼠），每组10只。测定并计算子宫指数，采用血糖仪测定空腹血糖（FBG）、餐后2 h血糖（2 h PBG），测定空腹胰岛素（FINS）并计算胰岛素敏感指数（ISI）和胰岛素抵抗指数（IR），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清雌二醇（E₂）、睾酮（T）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、泌乳素（PRL）、抗苗勒氏管激素（AMH）、胰岛素样生长因子1（IGF-1），卵巢组织C反应蛋白（CRP）、白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、总过氧化物酶活性（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）水平，苏木精-伊红（HE）染色法检查卵巢组织病理学变化，实时定量聚合酶链式反应（qPCR）测定子宫内膜雄激素受体相关蛋白（ARA）70、肉瘤基因羧基末端激酶结合蛋白（CBP）、可溶性补体受体1型（SCR1）、同源框异型基因A10（HOXA10） mRNA水平及卵巢组织腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ） mRNA表达，Western blot测定卵巢组织AMPK、GLUT4、PPARγ蛋白表达。结果与多囊卵巢综合征组比较，白术附子汤组、八珍汤组和八珍汤合白术附子汤组大鼠子宫指数，FINS、FBG、2 h PBG、IR水平，血清T、LH、FSH、PRL、AMH、IGF-1水平，卵巢组织CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC和MDA水平，子宫内膜ARA70、CBP、SCR1 mRNA水平均降低（P<0.05）；ISI，血清E₂，卵巢组织SOD，子宫内膜HOXA10 mRNA表达，卵巢组织AMPK、GLUT4、PPARγ mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）；八珍汤合白术附子汤组以上指标变化均较白术附子汤组和八珍汤组显著（P<0.05）。结论八珍汤合白术附子汤可通过改善多囊卵巢综合征大鼠糖代谢、卵巢组织氧化及炎症损伤、子宫内膜容受性、雌激素水平，抑制多囊卵巢综合征疾病进展，其机制可能与调节AMPK/GLUT4/PPARγ通路有关。

关键词: 术附汤, 八珍汤, 多囊卵巢综合征, 雌激素类, 糖代谢, 八珍汤合白术附子汤

Abstract:

Objective To study the regulation effects of Bazhen Decoction combined with Baizhu Fuzi Decoction on glucose metabolism and estrogen level in rats with polycystic ovary syndrome. Methods The rat model of polycystic ovary syndrome was established by subcutaneous injection of human chorionic gonadotropin (HCG) combined with insulin. Rats were randomly divided into the polycystic ovary syndrome group, the Baizhu Fuzi Tang group (6.4 g/kg), the Bazhen Tang group (9.2 g/kg), the Bazhen Tang combined with Baizhu Fuzi Tang group (11.55 g/kg) and the diethylstilbestrol group (0.5 mg/kg). A blank control group (unmodulated rats) was set up with 10 rats in each group. The uterine index of rats was determined and calculated. Fasting blood glucose (FBG), 2 h postprandish blood glucose (2 h PBG) and fasting insulin (FINS) were determined and insulin sensitivity index (ISI) and insulin resistance index (IR) were calculated. Serum estradiol (E₂), testosterone (T), luteinizing hormone (LH), follicle stimulating hormone (FSH), prolactin (PRL), anti-Mullerian tube hormone (AMH) and insulin-like growth factor 1 (IGF-1), C-reactive protein (CRP), interleukin (IL)-6, tumor necrosis factor (TNF)-α, total peroxidase activity (T-AOC), superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) levels in ovarian tissue were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The pathological changes of ovarian tissue were detected by hematoxylin-eosin (HE) staining. Real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) was used to determine mRNA levels of ARA70, CBP, SCR1 and HOXA10 in endometrium and mRNA expressions of AMPK, GLUT4 and PPARγ in ovarian tissue. Western blot assay was used to determine expression levels of AMPK, GLUT4 and PPARγ in ovarian tissue. Results Compared with the polycystic ovary syndrome group, uterine index, FINS, FBG, 2 h PBG, IR levels, serum T, LH, FSH, PRL, AMH, IGF-1 levels, ovarian tissue CRP, IL-6, TNF-α, T-AOC and MDA level, endometrial ARA70, CBP, SCR1 mRNA level of rats decreased significantly in the Baizhu Fuzi decoction group, the Bazhen decoction group and the Bazhen decoction combined with Baizhu Fuzi decoction group (P<0.05). ISI level, serum E₂ level, ovarian tissue SOD level, endometrial HOXA10 mRNA level, ovarian tissue AMPK, GLUT4 and PPARγ mRNA and protein levels were significantly increased (P<0.05). The above indexes were significantly changed in the Bazhen decoction and Bazhu Fuzi decoction group than those of the Bazhu Fuzi decoction group and the Bazhen decoction group (P<0.05). Conclusion Bazhen Decoction combined with Baizhu Fuzi Decoction can regulate glucose metabolism, inhibit ovarian tissue oxidation and inflammatory damage, improve endometrium tolerance, regulate estrogen level, and improve the progression of polycystic ovary syndrome in rats. The mechanism may be related to the regulation of AMPK/GLUT4/PPARγ pathway.

Key words: Zhu Fu Tang, Ba Zhen Tang, polycystic ovary syndrome, estrogens, glucose metabolism, Bazhen Decoction combined with Baizhu Aconite Decoction

中图分类号:

R285.5

图/表 9

参考文献 19

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基因名称	引物序列（5′→3′）	产物大小/ bp
子宫内膜
ARA70	上游：TTGCTACTGGAACAGGGACAC	283
	下游：CCCGTGTGTTAGTTCTGCTGT	283
CBP	上游：CTCCCCAAGTTGCTGA	191
	下游：CCCCTGTAGCGGGCAAA	191
SCR1	上游：AAGTATGGGTGGATGGAGTTCAG	143
	下游：ATGAGGTGCTAAGTGTCTTTCAG	143
HOXA10	上游：CCCACCAACATACAAAGCAG	172
	下游：TGAGCATAGCAAAGGTCAGG	172
GAPDH	上游：AGGTTGTCTCCTGCGACTTCA	161
	下游：CTGTTGCTGTAGCCGTATTCATTG	161
卵巢组织
AMPK	上游：GCTTGATTTGGTTCCCAGGACAGT	131
	下游：GTGCTGAGTTTGCTGTACCCATGT	131
GLUT4	上游：TTACCTGGAGATCGAATTCTGCTTG	164
	下游：GTGCTTTCGATGAAGTCTCACCTG	164
PPARγ	上游：TCACGCAAGAGCAAGTAG	157
	下游：CTGGACATTAGTGGGATGAG	157
GAPDH	上游：AGAAGGCTGGGGCTCATTTG	186
	下游：AGGGGCCATCCACAGTCTTC	186

基因名称	引物序列（5′→3′）	产物大小/ bp
子宫内膜
ARA70	上游：TTGCTACTGGAACAGGGACAC	283
	下游：CCCGTGTGTTAGTTCTGCTGT	283
CBP	上游：CTCCCCAAGTTGCTGA	191
	下游：CCCCTGTAGCGGGCAAA	191
SCR1	上游：AAGTATGGGTGGATGGAGTTCAG	143
	下游：ATGAGGTGCTAAGTGTCTTTCAG	143
HOXA10	上游：CCCACCAACATACAAAGCAG	172
	下游：TGAGCATAGCAAAGGTCAGG	172
GAPDH	上游：AGGTTGTCTCCTGCGACTTCA	161
	下游：CTGTTGCTGTAGCCGTATTCATTG	161
卵巢组织
AMPK	上游：GCTTGATTTGGTTCCCAGGACAGT	131
	下游：GTGCTGAGTTTGCTGTACCCATGT	131
GLUT4	上游：TTACCTGGAGATCGAATTCTGCTTG	164
	下游：GTGCTTTCGATGAAGTCTCACCTG	164
PPARγ	上游：TCACGCAAGAGCAAGTAG	157
	下游：CTGGACATTAGTGGGATGAG	157
GAPDH	上游：AGAAGGCTGGGGCTCATTTG	186
	下游：AGGGGCCATCCACAGTCTTC	186

组别	FINS/（mU/L）	FBG/（mmol/L）	2 h PBG/（mmol/L）	ISI	IR
空白对照组	12.42±1.02	4.58±1.28	4.91±0.36	-3.16±0.08	2.59±0.59
多囊卵巢综合征组	37.66±1.54^a	14.12±1.55^a	7.93±0.75^a	-5.82±0.06^a	22.73±0.82^a
白术附子汤组	33.92±1.79^b	10.30±1.06^b	6.84±0.52^b	-5.03±0.12^b	15.52±0.76^b
八珍汤组	26.68±2.30^b	8.23±1.71^b	6.32±0.59^b	-4.47±0.18^b	9.51±0.81^b
八珍汤合白术附子汤组	16.45±1.62^bcd	5.83±1.94^bcd	5.03±0.89^bcd	-3.83±0.17^bcd	4.27±0.58^bcd
己烯雌酚组	38.94±1.52^be	13.96±1.57^be	7.82±0.72^be	-5.71±0.34^be	23.05±1.05^be
F	542.963^＊	68.781^＊	32.811^＊	419.992^＊	1 346.924^＊

组别	FINS/（mU/L）	FBG/（mmol/L）	2 h PBG/（mmol/L）	ISI	IR
空白对照组	12.42±1.02	4.58±1.28	4.91±0.36	-3.16±0.08	2.59±0.59
多囊卵巢综合征组	37.66±1.54^a	14.12±1.55^a	7.93±0.75^a	-5.82±0.06^a	22.73±0.82^a
白术附子汤组	33.92±1.79^b	10.30±1.06^b	6.84±0.52^b	-5.03±0.12^b	15.52±0.76^b
八珍汤组	26.68±2.30^b	8.23±1.71^b	6.32±0.59^b	-4.47±0.18^b	9.51±0.81^b
八珍汤合白术附子汤组	16.45±1.62^bcd	5.83±1.94^bcd	5.03±0.89^bcd	-3.83±0.17^bcd	4.27±0.58^bcd
己烯雌酚组	38.94±1.52^be	13.96±1.57^be	7.82±0.72^be	-5.71±0.34^be	23.05±1.05^be
F	542.963^＊	68.781^＊	32.811^＊	419.992^＊	1 346.924^＊

组别	E₂/（pmol/L）	T/（nmol/L）	LH/（pmol/L）	FSH/（pmol/L）	PRL/（pmol/L）	AMH/（pmol/L）	IGF-1/（pmol/L）
空白对照组	101.07±2.87	124.91±2.27	85.65±7.83	19.11±8.45	270.58±10.73	8.75±3.36	1 031.46±16.53
多囊卵巢综合征组	36.91±6.04^a	172.14±2.29^a	189.22±6.13^a	65.73±7.89^a	462.70±4.59^a	32.13±1.25^a	1 864.66±27.03^a
白术附子汤组	46.85±1.83^b	146.63±2.79^b	158.00±10.67^b	44.80±5.01^b	404.50±9.31^b	25.80±1.51^b	1 775.17±24.12^b
八珍汤组	62.35±5.27^b	139.15±2.83^b	136.19±10.15^b	37.81±6.87^b	329.25±8.51^b	22.29±3.27^b	1 630.93±10.81^b
八珍汤合白术附子汤组	81.14±6.32^bcd	132.53±1.74^bcd	101.05±6.26^bcd	28.70±4.99^bcd	291.01±4.74^bcd	17.72±1.75^bcd	1 228.33±37.36^bcd
己烯雌酚组	91.97±5.11^be	126.68±2.04^be	86.19±10.03^be	26.32±6.79^b	280.72±5.59^be	11.02±2.57^be	1 052.40±28.64^be
F	275.842^＊	554.231^＊	236.003^＊	60.253^＊	1 033.561^＊	134.461^＊	2 114.824^＊

八珍汤合白术附子汤对多囊卵巢综合征大鼠糖代谢及雌激素水平的调节作用

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组别	CRP/（mg/L）	IL-6/（ng/L）	TNF-α/（ng/L）	T-AOC/（U/mL）	SOD/（U/mL）	MDA/（μmol/L）
空白对照组	0.95±0.12	19.93±2.15	12.74±1.86	1.47±0.56	83.17±2.77	4.49±0.92
多囊卵巢综合征组	3.48±0.08^a	34.95±1.51^a	47.39±1.94^a	7.95±0.92^a	13.62±1.34^a	15.82±1.45^a
白术附子汤组	2.83±0.27^b	30.43±1.72^b	31.20±1.48^b	4.59±0.93^b	42.28±2.38^b	12.88±1.39^b
八珍汤组	2.06±0.23^b	27.95±1.18^b	23.55±1.68^b	2.57±0.83^b	61.91±2.73^b	9.22±1.28^b
八珍汤合白术附子汤组	1.17±0.35^bcd	23.47±1.76^bcd	16.37±1.25^bcd	1.79±0.54^bcd	75.98±2.64^bcd	5.25±1.02^bcd
己烯雌酚组	1.93±0.60^be	25.67±1.82^be	20.37±1.18^be	2.39±0.62^be	62.35±1.66^be	6.95±1.82^be
F	95.292^＊	123.231^＊	566.983^＊	125.281^＊	1 334.101^＊	111.532^＊

组别	ARA70	CBP
空白对照组	1.00±0.00	1.00±0.00
多囊卵巢综合征组	6.47±0.26^a	5.27±0.41^a
白术附子汤组	4.77±0.38^b	4.47±0.46^b
八珍汤组	3.32±0.26^b	3.25±0.21^b
八珍汤合白术附子汤组	1.49±0.18^bcd	1.68±0.11^bcd
己烯雌酚组	2.05±0.31^be	1.84±0.15^be
F	170.301^＊	82.174^＊
组别	SCR1	HOXA10
空白对照组	1.00±0.00	1.00±0.00
多囊卵巢综合征组	5.66±0.35^a	0.11±0.04^a
白术附子汤组	3.75±0.44^b	0.32±0.08^b
八珍汤组	2.62±0.31^b	0.56±0.13^b
八珍汤合白术附子汤组	1.31±0.20^bcd	0.88±0.23^bcd
己烯雌酚组	1.15±0.17^be	0.93±0.12^be
F	125.612^＊	103.322^＊

组别	AMPK	GLUT4	PPARγ
空白对照组	1.07±0.07	1.26±0.08	1.08±0.04
多囊卵巢综合征组	0.19±0.02^a	0.31±0.08^a	0.22±0.08^a
白术附子汤组	0.38±0.05^b	0.46±0.07^b	0.47±0.04^b
八珍汤组	0.68±0.04^b	0.70±0.10^b	0.69±0.07^b
八珍汤合白术附子汤组	0.95±0.06^bcd	0.99±0.08^bcd	1.00±0.04^bcd
己烯雌酚组	0.85±0.07^be	0.79±0.05^be	0.89±0.05^be
F	322.164^＊	210.503^＊	280.301^＊

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[3]	赵元元, 吴小华. 基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨LINC00173对多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬的影响[J]. 天津医药, 2024, 52(11): 1121-1126.
[4]	乔娜, 田英, 陈杨, 郝静. LncRNA MALAT1对PCOS颗粒细胞凋亡、自噬和PI3K/Akt/mTOR通路的影响[J]. 天津医药, 2024, 52(10): 1020-1024.
[5]	赵芳园, 邹红, 时思毛, 徐芳, 左冬冬. PCOS患者血清血管生成素样蛋白2、4水平与卵巢间质血流动力学的关系[J]. 天津医药, 2023, 51(9): 988-992.
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组别	AMPK	GLUT4	PPARγ
空白对照组	1.00±0.00	1.00±0.00	1.00±0.00
多囊卵巢综合征组	0.14±0.09^a	0.17±0.04^a	0.07±0.02^a
白术附子汤组	0.45±0.11^b	0.62±0.17^b	0.21±0.06^b
八珍汤组	0.73±0.08^b	0.74±0.08^b	0.48±0.08^b
八珍汤合白术附子汤组	0.92±0.13^bcd	0.93±0.16^bcd	0.94±0.12^bcd
己烯雌酚组	0.61±0.07^be	0.59±0.06^be	0.62±0.07^be
F	88.571^＊	109.183^＊	212.801^＊

组别	AMPK	GLUT4	PPARγ
空白对照组	1.00±0.00	1.00±0.00	1.00±0.00
多囊卵巢综合征组	0.14±0.09^a	0.17±0.04^a	0.07±0.02^a
白术附子汤组	0.45±0.11^b	0.62±0.17^b	0.21±0.06^b
八珍汤组	0.73±0.08^b	0.74±0.08^b	0.48±0.08^b
八珍汤合白术附子汤组	0.92±0.13^bcd	0.93±0.16^bcd	0.94±0.12^bcd
己烯雌酚组	0.61±0.07^be	0.59±0.06^be	0.62±0.07^be
F	88.571^＊	109.183^＊	212.801^＊