天津医药

天津医药 ›› 2015, Vol. 43 ›› Issue (9): 978-981.doi: 10.11958/j.issn.0253-9896.2015.09.005

• 细胞与分子生物学 • 上一篇    下一篇

香烟提取物对气道平滑肌细胞增殖作用的研究

管频1, 2， 于化鹏1△， 吴智勇2,， 李伟2， 吴洁3   

  1. 1广东广州南方医科大学 （邮编510000）； 2海口， 海南省人民医院医疗保健四区； 3海口， 海南医学院
  • 收稿日期:2014-11-26 修回日期:2015-01-05 出版日期:2015-09-15 发布日期:2015-09-15
  • 通讯作者: 于化鹏 E-mail: gp0318@126.com E-mail:gp0318@126.com
  • 作者简介:作者简介： 管频 （1980）， 女， 医学博士， 主治医师， 主要从事慢性阻塞性肺疾病气道重塑及气道炎症研究
  • 基金资助:
    基金项目： 海南省自然科学基金资助课题 （807081）

Effects of tobacco extract on proliferation of human airway smooth muscle cells

GUAN Pin1,2,YU Huapeng1△, WU Zhiyong2, LI Wei2， WU Jie3   

  1. 1 Southern Medical University, Guangzhou 510000, China; 2 Department of Medical Health Center, Hainan Provincial People Hospital; 3 Hainan Medical University, Haikou
  • Received:2014-11-26 Revised:2015-01-05 Published:2015-09-15 Online:2015-09-15
  • Contact: E-mail: gp0318@126.com E-mail:gp0318@126.com

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摘要： 摘要： 目的 探讨香烟提取物 （CSE） 对人气道平滑肌细胞 （ASMCs） 增殖以及钙网织蛋白 （CRT）、 CCAAT 增强子结合蛋白α （CEBPα） 表达的影响及机制。方法 （1） 通过收集经不同浓度 CSE 处理 24 h 的 ASMCs， 分为对照组、 2.5%CSE 组、 5%CSE 组、 10%CSE 组。以 MTT 法分析各组细胞增殖情况， 采用逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR） 检测各组细胞 CEBPα的 mRNA 水平； 免疫印迹法检测 4 组细胞 CRT、 CEBPα的蛋白水平。（2） 在 10%CSE 组， 分别在 ASMCs 中转染阴性对照 siRNA、 CRT 的 siRNA， 比较 2 组 ASMCs 的 CEBPα、 CRT 表达及细胞增殖情况。结果 （1）对照组、 2.5％CSE 组、 5％CSE 组、 10％CSE 组 ASMCs 的 CEBPα蛋白表达依次递减， CRT 和细胞增殖程度呈依次增高（P＜0.05）； 而 CEBPα mRNA 表达差异无统计学意义 （P＞0.05）。（2） 在 10％CSE 作用下， CRTsiRNA 组中 ASMCs 的 CEBPα表达较阴性对照 siRNA 组增强 （P＜0.05）， 而 CRT 和细胞增殖程度均较相应阴性对照 siRNA 组减弱 （P＜ 0.05）。结论 CSE 可使 ASMCs 中 CRT 的表达增强， 从而抑制 CEBPα mRNA 的翻译， 使 CEBPα的表达减少， 最终促进 ASMCs 的增殖。

关键词: 肌细胞, 平滑肌, 细胞增殖, 肺疾病, 慢性阻塞性, 体外研究, 香烟提取物, 钙网织蛋白, CCAAT 增强子结合蛋白

Abstract: Abstract: Objective To explore the effects and mechanism of cigarette smoke extract (CSE) on the proliferation of air⁃ way smooth muscle cells (ASMCs) and the expression of CCAAT/enhancer-binding protein (CEBPα) and calreticulin. Meth⁃ ods (1) The ASMCs were stimulated with different concentrations of CSE for twenty-four hours. According to the concentra⁃ tions of CSE， the cells were divided into control group, 2.5% CSE group, 5% CSE group and 10%CSE group. The prolifera⁃ tion of ASMCs was measured by MTT colrimetric method. The CEBPαmRNA was analyzed by RT-PCR. Western bloting as⁃ say was performed to detect the levels of CRT and CEBPα protein. (2) In 10%CSE group, transfection of the siRNA respec⁃ tively for negative control or calreticulin was performed in accordance with instructions. The cell proliferation and the expres⁃ sion of calreticulin and CEBPα were compared in negative control siRNA group and calreticulin siRNA group. Results (1) With the increasing of the concentrations of CSE, the protein expression of CEBPα decreased gradually (P＜0.05), while the proliferation of ASMCs and the protein expression of calreticulin increased (P＜0.05), but the expression of CEBPα mRNA in ASMCs showed no significant difference in groups with different concentrations of CSE (P＞0.05). (2) Under the 10%CSE, the expression of CEBPα was significantly higher in CRT siRNA group than that in negative control group (P＜0.05)， but the cell proliferation and CRT were significantly lower in the calreticulin siRNA group than those in negative control siRNA group (P＜0.05). Conclusion The CSE exposure contributes to the expression of calreticulin protein， and then inhibits the translation of CEBPα mRNA， thus promotes the proliferation of ASMCs.

Key words: myocytes, smooth muscle, cell proliferation , pulmonary disease, chronic obstructive, in vitro, cigarette
smoke extract； calreticulin； CCAAT enhancer-binding protein