天津医药

天津医药 ›› 2016, Vol. 44 ›› Issue (12): 1409-1413.doi: 10.11958/20161193

• 细胞与分子生物学 •    下一篇

雌激素受体对乳腺癌细胞截短型神经激肽受体-1 的调控作用

刘晓彬， 仝颖娜， 张露芳， 周云丽   

  1. 天津医科大学肿瘤医院检验科， 国家肿瘤临床医学研究中心， 天津市恶性肿瘤临床医学研究中心， 天津市 “肿瘤防治” 重点实验室 （邮编 300060）
  • 收稿日期:2016-10-19 修回日期:2016-10-31 出版日期:2016-12-15 发布日期:2017-01-26
  • 通讯作者: 周云丽 △通讯作者 E-mail: zhouyunli@tjmuch.com E-mail:zhouyunli@tjmuch.com
  • 作者简介:刘晓彬 （1990）， 女， 硕士研究生， 主要从事乳腺癌神经激肽受体表达调控的研究
  • 基金资助:
    microRNA-206 和 microRNA-22 对乳腺癌细胞神经激肽受体 -1 的表达调控研究;microRNA-206 和 microRNA-22 对乳腺癌细胞神经激肽受体 -1 的表达调控研究

Study on the regulation of ERα on NK1R-Tr in breast cancer cells

LIU Xiaobin, TONG Yingna, ZHANG Lufang, ZHOU Yunli △   

  1. Department of Clinical Laboratory, Cancer Institute and Hospital, Tianjin Medical University, National Clinical Research Center of Cancer, Tianjin Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy, Tianjin 300060, China
  • Received:2016-10-19 Revised:2016-10-31 Published:2016-12-15 Online:2017-01-26
  • Contact: △Corresponding Author E-mail: zhouyunli@tjmuch.com E-mail:zhouyunli@tjmuch.com
  • Supported by:
    国家自然科学基金资助项目 （81201653）

PDF (PC)

3916

摘要： 摘要： 目的 探讨雌激素受体 α （ERα） 阳性的乳腺癌细胞中 ERα 对神经激肽受体-1 截短型变异体 （NK1R-Tr）的调控作用， 以及 ERα 是否通过调控 NK1R-Tr 的表达， 间接调控细胞的增殖能力。方法 染色质免疫共沉淀（CHIP） 实验验证 ERα 是否可以结合到 NK1R-Tr 启动子上游的 ERα 反应元件， 直接调控 NK1R-Tr 的表达； 荧光素酶报告基因实验验证 ERα 是否对 NK1R-Tr 的表达起正性调控作用。Western blot 实验和 RT-PCR 实验检测乳腺癌细胞系 MCF-7 和 T47D 的 ERα 和 NK1R-Tr 在蛋白水平和 mRNA 水平的表达情况； 以及在 ERα 激动剂雌二醇 （E2）刺激的条件下， 小干扰 RNA 敲除 ERα 后， NK1R-Tr 在不同水平的表达情况； 小干扰 RNA 敲除 NK1R-Tr 后， CCK-8 和克隆形成实验检测敲除 NK1R-Tr 的乳腺癌细胞的增殖能力。结果 在 NK1R-Tr 基因启动子上游存在 ERα 的反应元件， ERα 在 E2 存在条件下作用于该反应元件， 对 NK1R-Tr 的表达起正性调控作用。同样在 E2 刺激的条件下，敲除乳腺癌细胞 MCF-7 内源性 ERα 后， NK1R-Tr 在蛋白水平和 mRNA 水平的表达均下降； 且敲除 NK1R-Tr 的 MCF-7 细胞增殖能力较未敲除组明显降低。结论 在 ERα 阳性的乳腺癌细胞中， ERα 正性调控 NK1R-Tr 的表达，从而增强细胞的增殖能力。

关键词: 乳腺肿瘤, 细胞系, 肿瘤, 雌激素受体 α, 受体, 神经激肽 1, RNA, 小分子干扰, 染色质免疫沉淀法, 细胞增殖, 荧光素酶报告基因

Abstract: Abstract: Objective To analyze the regulation of estrogen receptor α (ERα) on truncated neurokinin- 1 receptor (NK1R-Tr), and the influence of this regulation on cell proliferation in estrogen receptor-positive breast cancer cell lines. Methods The chromatin immune coprecipitation (CHIP) was used to observe the transcriptional regulation function of ERα on NK1R- Tr in breast cancer cells. Luciferase reporter gene assay was used to verify whether ERα played a positive regulatory role in the expression of NK1R-Tr. Western blot assay and real-time-PCR were used to detect the expression of ERα and NK1R-Tr in breast cancer cells, MCF-7 and T47D, as well as the expression of NK1R-Tr protein and mRNA level. NK1R- Tr levels were also detected after using estradiol (E2, ERα agonist) and small interfering RNA (knock out ERα). CCK- 8 and clone formation experimen were used to detect the proliferation ability of breast cancer cells after knocking out NK1R-Tr with small interfering RNAs. Results CHIP test and Luciferase reporter gene assay proved that ERα can positively regulate the expression of NK1R- Tr via the ERα sequences in the upstream of the NK1R- Tr gene promoter. The expression of NK1R-Tr at both protein level and mRNA level dropped in the estrogen receptor-positive breast cancer cell line MCF-7 upon knocking out ERα. After knocking out NK1R-Tr, the proliferation ability of estrogen receptor- positive breast cancer cells was lower than that of the control group. Conclusion The ERα positively regulates the expression of NK1R-Tr, resulting in the increased cell proliferation in estrogen positive breast cancer cells.

Key words: breast neoplasms, cell line, tumor, estrogen receptor alpha, receptors, neurokinin- 1, RNA, small interfering, chromatin immunoprecipitation, cell proliferation, luciferase reporter