天津医药

• 实验研究 • 上一篇    下一篇

双启动子shRNA 表达载体对hTERT和bcl-2基因表达的抑制作用

张金晓1,汪蓓蕾2,3,郭刚2,张瑞2   

  1. 1. 天津药物研究院
    2. 天津医科大学
    3.
  • 收稿日期:2011-04-14 修回日期:2011-12-23 出版日期:2012-05-15 发布日期:2012-05-15
  • 通讯作者: 张瑞

  • Received:2011-04-14 Revised:2011-12-23 Published:2012-05-15 Online:2012-05-15
  • Contact: RUI ZHANG

PDF (PC)

2067

摘要： 目的: 将已构建好的双启动子shRNA表达载体pdPRO-TB、单启动子对照pdPRO-T、pdPRO-B和阴性对照质粒pdPRO转染hela细胞，研究双启动子shRNA表达载体可否同时抑制双基因的表达，并且通过建立这种模式化工具载体，为今后的实验研究开拓新的思路。方法: 分别从构建好的大杆菌DH5α菌体中提取含有双启动子shRNA表达载体pdPRO-TB、单启动子对照pdPRO-T、pdPRO-B和阴性对照质粒pdPRO，通过脂质体介导瞬时转染hela细胞，镜下观察细胞形态。实时荧光定量RCR检测hTERT和bcl-2基因的表达水平。结果: 转染pdPRO-T和pdPRO-B的hela细胞生长受到抑制，转染pdPRO-TB的hela细胞生长抑制更为明显。转染pdPRO-T的hela细胞hTERT基因表达明显抑制，bcl-2基因无明显抑制；转染pdPRO-B的hela细胞bcl-2基因表达明显抑制， hTERT基因无明显抑制；而转染pdPRO-TB的hela细胞hTERT基因和bcl-2基因均受到明显抑制。。结论: 双启动子shRNA表达载体构建成功，可以同时抑制双基因的表达。该方法可作为新的研究手段运用于基因治疗等领域，构建双启动子shRNA表达载体，使其在细胞中表达两个不同的siRNA，同时诱导两个基因的表达沉默，达到双基因治疗的目的。

关键词: RNA干扰, shRNA, 基因沉默, 转染, 定量PCR