丁浩1,张吉翔2
Hao Ding,
摘要: 摘 要 目的:探讨人着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)和P53对人肝癌细胞株HepG2.2.15增殖及乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)、Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法:用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2转染HepG2.2.15细胞,转染后第2天给予20μM的Pifithrin-α(P53抑制剂)孵育24 h。实验分为5组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组;(4)pEGFP-N2/XPD + Pifithrin-α组;(5)Pifithrin-α组。用RT-PCR和Western blotting检测XPD、HBx、Bcl-2和Bax表达的变化;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期。结果:RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高(P均 <0.001);XPD表达增高使得HBx和Bcl-2表达降低,同时使得Bax表达增高,而Pifithrin-α能抑制XPD这一作用(P 均<0.01)。MTT结果显示,XPD表达增高抑制了细胞增殖活力,而Pifithrin-α能抑制XPD降低细胞活力的作用(P均 <0.001)。流式细胞仪结果显示,XPD表达增高引起了细胞G1期增加、S期减少,而Pifithrin-α能抑制XPD这一作用(P均 <0.001)。结论:XPD是通过P53途径抑制肝癌细胞增殖的;XPD可通过P53途径下调HBx和Bcl-2的表达并上调Bax的表达;XPD、P53和HBx三者之间能相互作用、相互影响,共同调节肝癌的发生与发展。