郭东1,张闽红2,3,肖清萍2,3,刘建文1
摘要: 目的 探讨小鼠心肌梗死模型中microRNA-21(miR-21)对心脏成纤维细胞增殖和分化的影响。方法 利用左前降支结扎法构建C57/BL6小鼠心肌梗死模型,以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组心肌组织miR-21的表达。体外实验分为3组:随机对照组、空白对照组和miR-21 mimic组。利用miR-21的模拟物(miR-21 mimic)转染小鼠成纤维细胞,使其在细胞中呈过表达状态,然后标记5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU),通过荧光显微镜观察成纤维细胞的增殖情况,并利用蛋白质印迹技术(Western Blot)检测成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和小鼠Smad同源物7(Smad7)的表达。结果 与假手术组比较,心梗手术组梗死交界区的miR-21的表达量较远端区[(4.839 ±0.705)×10-4 vs(1.620±0.451)×10-4]明显上调(P <0.01)。与随机对照组和空白对照组比较,miR-21 minic组miR-21的表达[(4.839±0.705)×10-4 vs(1.143±0.064)×10-4 vs(1.017±0.201)×10-4]显著上调(P<0.01)。与随机对照组和空白对照组比较,miR-21 minic组成纤维细胞EdU染色阳性率[(27.892±1.645)% vs(12.553±1.227)% vs(13.946±1.550)%]显著增加(P<0.01);同时,miR-21 minic组成纤维细胞Smad7基因的表达明显下调,而α-SMA的表达显著上调。结论 心肌梗死后,上调的miR-21可以通过调节转化生长因子(TGF)-β信号通路中Smad7的表达促进成纤维细胞的增殖和分化,进而调节心梗后的心脏重塑。