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人源Fab段噬菌体抗体库的构建及抗IL-4抗体的初步筛选

胡占东1,公倩2,3,朱铁虹2,畅继武1   

  1. 1. 天津市泌尿外科研究所
    2. 天津医科大学总医院
    3.
  • 收稿日期:2011-01-17 修回日期:2011-03-12 出版日期:2011-06-15 发布日期:2011-06-15
  • 通讯作者: 畅继武

  • Received:2011-01-17 Revised:2011-03-12 Published:2011-06-15 Online:2011-06-15

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摘要： [摘要] 目的： 构建大容量人源Fab噬菌体抗体库及筛选特异性抗体 方法：采集18位成人外周血，分离淋巴细胞，细胞室培养淋巴细胞。提取总RNA，反转录成cDNA，用PCR扩增Fab段抗体基因，用试剂盒回收纯化抗体基因，插入载体pComb3XSS内，构建人源Fab噬菌体抗体库，用限制性内切酶鉴定基因的插入。用抗原IL-4对抗体库进行筛选。五轮筛选后，随机挑取30个单克隆用Phage ELISA和酶切进行检测。并且对阳性克隆DNA的序列进行测定。结果：构建的人源Fab噬菌体抗体库库容为2.4×108 ，酶切鉴定插入基因片段大小正确，ELISA鉴定阳性克隆有抗原结合活性。测序结果证实为为人免疫球蛋白可变区基因。结论：构建了大容量人源Fab噬菌体抗体库，从中筛选出抗IL-4人源Fab抗体，有望为获得其他抗体提供源泉，为疾病的诊断与治疗打下基础

关键词: 淋巴细胞, 噬菌体抗体库, Fab段, IL-4