闫永嘉1,付蔚华2,高莹1,朱理玮1
摘要: 【摘要】 目的 构建分子嵌合MHC-Ⅰ基因小鼠骨髓造血干细胞,并探讨其诱导T细胞对异基因小鼠DC无反应的机理。方法 密度梯度法分离培养BalB/C小鼠骨髓造血干细胞。构建携带C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因慢病毒载体,感染BalB/C小鼠骨髓造血干细胞,构建分子嵌合细胞。输注Balb/C小鼠后7天,获取脾脏T淋巴细胞,与C57BL/6小鼠DC进行混合淋巴细胞培养,测定刺激指数。结果 成功体外分选及培养BalB/C小鼠骨髓造血干细胞,流式细胞术检测CD34阳性率可达(34.64±2.76)%。病毒载体感染BalB/C小鼠骨髓造血干细胞3天,实时定量PCR检测,C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因mRNA水平表达量比空白对照组增加657倍,比阴性对照组增加666倍。流式细胞学检测病毒感染组C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ蛋白表达率可达98.17%,较空白对照组及阴性对照组均有明显升高。单向混合淋巴细胞培养结果显示,C57 BL/6小鼠DC对输注分子嵌合细胞后BalB/C小鼠脾脏T细胞刺激指数明显降低。(P<0.01) 结论 成功构建了过表达慢病毒载体。应用过表达慢病毒载体可以成功构建分子嵌合细胞。将分子嵌合细胞输注小鼠后,其脾脏T细胞对异基因小鼠DC反应明显减低。