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多拷贝水蛭素基因在毕赤酵母中的分泌型表达
马精彩1 ,曹晓娜2 ,熊蔚俐2 ,李敬华2 ,左爱军2 ,孙蓓3 ,梁东春4
2010, (2):
0-0 .
摘要
(
815 )
摘要 目的:通过多拷贝克隆技术实现水蛭素(Hirudin)基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达。方法:利用基因重组技术,从pPIC9-Hirudin中扩增α-facor-Hirudin插入到载体pAO815中,并构建pAO815-(α-Hirudin)n 多拷贝重组质粒,转化毕赤酵母GS115后进行诱导表达,并鉴定表达产物活性。结果:PCR证实成功构建了水蛭素多拷贝毕赤酵母表达载体pAO815-(α-Hirudin)n,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实能成功高效分泌重组水蛭素,活性测定表明表达的水蛭素有良好的抗凝血活性。结论:成功构建了分泌型水蛭素多拷贝质粒,并筛选出多拷贝稳定整合表达菌株,成功表达出具有抗凝血活性1600ATU/ml的重组水蛭素,为大规模表达纯化水蛭素蛋白及其临床应用奠定了基础。
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计量指标
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