天津医药 ›› 2021, Vol. 49 ›› Issue (10): 1031-1037.doi: 10.11958/20210777
宋鹏霞,李群锋,曹焰晖,姚水洪
SONG Peng-xia, LI Qun-feng, CAO Yan-hui, YAO Shui-hong
摘要: 目的 探讨miR-422a靶向激肽释放酶-4(KLK4)对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧 光定量PCR法(qPCR)检测人宫颈癌细胞HeLa、SiHa和人正常宫颈上皮细胞H8中miR-422a的表达;将宫颈癌HeLa 细胞分为 blank 组、miR-NC 组、miR-422a 组、mut miR-422a 组、miR-422a+pcDNA 组、miR-422a+pcDNA-KLK4 组。 CCK-8实验和Transwell实验检测各组宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的能力;TargetScan软件预测miR-422a可 能调控结合的靶基因,双荧光素酶活性实验对靶向关系进行验证。Western blot检测各组细胞KLK4蛋白表达水平。 结果 与人正常宫颈上皮细胞H8相比,宫颈癌HeLa、SiHa细胞中miR-422a呈现低表达(P<0.01),选择宫颈癌HeLa 细胞进行后续实验;与miR-NC组和blank组相比,miR-422a组培养4、6 d细胞增殖能力降低,培养6、12 h细胞迁移 和侵袭数量减少(P<0.05);与miR-422a+pcDNA组相比,miR-422a+pcDNA-KLK4组培养4、6 d细胞增殖能力明显 升高,培养6、12 h细胞迁移和侵袭数量增加(P<0.01)。TargetScan软件预测发现KLK4基因与miR-422a存在结合位 点,并经双荧光素酶报告基因实验验证。与 miR-NC 组相比,miR-422a 组中 KLK4 蛋白的表达水平降低,与 miR- 422a 组相比,mut miR-422a 组中 KLK4 蛋白的表达水平升高(P<0.01),与 miR-422a+pcDNA 组相比,miR-422a+ pcDNA-KLK4组中KLK4蛋白的表达水平升高(P<0.01)。结论 miR-422a可通过靶向KLK4蛋白的表达抑制宫颈 癌细胞增殖、迁移和侵袭。