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不同浓度葡萄糖对小鼠海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡的影响
朱金凤, 许永劼, 朱丽英, 代龙光, 钱雯, 张競之, 许雯, 李兴, 潘卫
2019, 47 (11):
1121-1125.
doi: 10.11958/20191994
摘要
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目的 探讨不同浓度葡萄糖对小鼠海马神经元细胞系 HT-22细胞凋亡的作用及机制。方法 体外培养小鼠海马神经元 HT-22细胞,使用不同浓度的高糖培养液(25、35、45、55、65、75 mmol/L)分别作用细胞 24、48、72 h,以 25 mmol/L 糖浓度为对照组,其余组为实验组。采用 CCK-8 法检测各组细胞活力变化,筛选出最佳作用时间。HT-22细胞经不同浓度葡萄糖作用 48 h后,微板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率;光学显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测 Bcl-2、Bax蛋白表达量的变化。结果 CCK-8结果显示,高糖可抑制 HT-22细胞的活力,其抑制作用具有剂量和时间依赖性。高糖作用时间48 h时,细胞活力≥80%,可满足后续实验要求。随着葡萄糖浓度的增高,出现细胞数目减少,胞体变大,部分胞核溶解,突触断裂等改变,并且 LDH释放率及凋亡率也明显增高(P<0.05),Western blot结果显示凋亡蛋白 Bcl-2表达下降(P<0.05),Bax表达增高(P<0.05)。结论 高糖能显著抑制 HT-22细胞生长和活力,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与 Bcl-2、Bax表达有关。
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