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PDCD4表达下调通过pAKT/pGSK3β途径促进胃癌顺铂耐药的机制初探
柳丹 , 汤志明 , 武福云 , 赵红艳 , 柯镜 , 向鹏 , 金佳晴 , 李珊
2019, 47 (5):
454-458.
doi: 10.11958/20182153
摘要
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摘要:目的 探讨程序性细胞凋亡因子4(PDCD4)表达下调在顺铂诱导胃癌细胞凋亡中的作用机制,为胃癌的
顺铂耐药提供新的分子靶点。方法 通过在人胃癌细胞系SGC7901中敲减表达PDCD4基因,顺铂诱导细胞凋亡,将
细胞分为shNC组、shPDCD4组、shNC加药组和shPDCD4加药组,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测PDCD4 mRNA
表达水平;Caspase-3活性测定试剂盒、Hoechst染色结合细胞免疫荧光检测细胞凋亡水平;Western blot检测磷酸化蛋
白激酶B(pAKT)和磷酸化糖原合成酶激酶3β(pGSK3β)蛋白表达水平。在细胞中加入特异性Akt抑制剂,将细胞分
为 shNC 加药组、shPDCD4 加药组、LY294002 阻断组(转染 shPDCD4 质粒,先加 LY294002 再加入顺铂处理)和
Wortmannin 阻断组(转染 shPDCD4 质粒,先加 Wortmannin 再加入顺铂处理),Western blot 检测聚 ADP-核糖聚合酶
(PARP)蛋白表达水平。结果 qRT-PCR 和Western blot 检测结果证实稳定转染ShPDCD4质粒的SGC7901细胞中
PDCD4的mRNA表达和蛋白表达均有显著下降,体外稳定转染ShPDCD4的SGC7901胃癌细胞株构建成功。相较于
shNC 加药组,shPDCD4 加药组 Caspase3 活性下降,细胞凋亡降低(P<0.05)。PDCD4 表达下调将导致 pAKT 和
pGSK3β的表达水平提高(P<0.05),应用Akt抑制剂(LY294002、Wortmannin)阻断该信号通路后,PARP的相对表达
水平重新上调(P<0.05)。结论 PDCD4表达下调能够通过pAKT/pGSK3β途径降低顺铂引起的胃癌细胞凋亡,进而
促进细胞顺铂耐药的形成。
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