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3-O-C12-HSL通过抑制lncRNA CD48-AS和CD48的表达而阻碍Mo-DCs成熟
罗燕芬 , 庄奇真 , 张轩 , 陈茶 , 刘杨 , 颜星星 , 肖倩 , 李有强
2021, 49 (12):
1233-1239.
doi: 10.11958/20210909
摘要
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目的 筛选并阐明长链非编码RNA(lncRNA)CD48-AS与其反义互补分子CD48 mRNA在N-3-氧代十二
烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C12-HSL)阻碍人单核细胞诱导的树突状细胞(Mo-DCs)成熟过程中发挥作用的机制。
方法 从健康人外周血中分离Mo-DCs,将未成熟的Mo-DCs细胞分为阴性对照组(0.1% DMSO)、脂多糖(LPS)阳性
对照组(100 μg/L的LPS)和实验组(100 μg/L LPS+40 μmol/L 3-O-C12-HSL)进行lncRNA芯片检测。筛选lncRNA表
达谱中差异表达 5 倍以上的自然反义 lncRNA 进行聚类分析,从中筛选差异具有统计学意义的自然反义 lncRNA
CD48-AS。未成熟的 Mo-DCs 分为阴性对照组、LPS 阳性对照组以及 LPS+C5、C10、C25 实验组(分别加入 5、10、
25 μmol/L的3-O-C12-HSL)。利用荧光定量PCR检测lncRNA CD48-AS和反义分子CD48 mRNA在实验体系中的表
达水平;通过生物信息学分析lncRNA CD48-AS与CD48反义互补区及其蛋白编码功能;通过核糖核酸酶保护实验
(RPA)验证lncRNA CD48-AS是否与CD48形成二聚体,从而通过影响靶CD48的表达来发挥调控作用。最后检测
lncRNA CD48-AS在细胞内的定位。结果 3-O-C12-HSL处理Mo-DCs后lncRNA表达谱出现了特异性改变。3-OC
12-HSL可下调由LPS诱导的Mo-DCs中lncRNA CD48-AS及其反义靶分子CD48的表达。生物信息学分析lncRNA
CD48-AS 不具备蛋白编码功能,为非编码 RNA;lncRNA CD48-AS 与 CD48 形成 RNA 二聚体从而减少 RNA 酶对
CD48 mRNA的降解,使得CD48 mRNA表达增加;lncRNA CD48-AS在Mo-DCs中主要定位在细胞核中,细胞质中表
达量较少。结论 3-O-C12-HSL可通过下调lncRNA CD48-AS,进而影响CD48的表达来阻碍Mo-DCs的成熟。
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