张梦晓1,2,尚曼2,张琦2,王瑶2,吴艳娜2,宋君秋2,刘艳霞3
摘要: 【摘要】 目的 建立流式细胞术对大鼠循环血中细胞微囊泡(MVs)的检测方法,对心肌缺血预适应(IPC)处理大鼠循环血中血小板来源的MVs(PMVs)及内皮细胞来源的MVs(EMVs)进行测定。方法 大鼠经腹主动脉取血,枸橼酸钠抗凝,室温下经两步离心得无血小板血浆(PFP)。PFP中分别加入FITC标记的血小板表面标志物CD61单抗或PE标记的内皮细胞表面标志物CD144单抗,采用1 μm标准微球做粒径对照,2 μm标准微球用于计数,流式细胞仪进行检测。结果 3.5 %枸橼酸钠与血液按体积比1:4混匀,离心后可得均匀、清亮的上清。PFP中1 μm以下粒子信号占全部信号的99 %以上。PMVs和EMVs分别为CD61阳性和CD144阳性的粒子,直径均小于1 μm。IPC处理大鼠循环血中PMVs浓度为4053±1987个/μL,EMVs浓度为4870±825个/μL。结论 成功建立和优化了流式细胞术测定大鼠循环血中MVs的方法,并通过对IPC处理大鼠循环血中PMVs和EMVs的测定对MVs的检测方法进行了验证。