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长链非编码 RNA HOTAIR 影响人舌鳞癌细胞 Tb3.1 增殖与凋亡的体内外研究

郭文宇孔令平孙珊珊王宇赵明慧周旋王旭东张仑

2016, 44 (10): 1185-1189. doi: 10.11958/20150403

摘要 ( 855 )

PDF(1349KB) ( 3998 )

目的研究长链非编码 RNA HOTAIR 对人舌鳞癌细胞系 Tb3.1 增殖与凋亡的影响。方法使用 HOTAIR siRNA（siHOTAIR）敲低 HOTAIR 的表达；实验分为 siHOTAIR 组、无义序列组和空白对照组。前 2 组分别用 siHOTAIR 和无义序列转染舌鳞癌细胞，空白对照组细胞不做任何处理。实时定量 PCR 检测 HOTAIR 的表达水平；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 Tb3.1 细胞增殖； Western blot 检测 B 细胞淋巴瘤 2（Bcl-2）、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、BAX 的表达；流式细胞仪检测细胞凋亡；平板克隆形成实验检测细胞增殖情况；并行细胞衰老检测。动物实验建立 Tb3.1 裸鼠皮下荷瘤模型，通过免疫组织化学染色及 TUNEL 法评价干扰 HOTAIR 后对 Tb3.1 细胞增殖、凋亡的作用。结果 siHOTAIR 处理后 HOTAIR 的表达水平降低； Western blot 结果示 Cleaved Caspase-3 和 BAX 表达水平升高， Bcl-2 表达水平降低。 MTT 结果显示 siHOTAIR 组细胞增殖受到抑制；流式细胞示 siHOTAIR 组细胞凋亡升高；细胞衰老实验显示 siHOTAIR 组细胞衰老数目增加；免疫组化结果显示， siHOTAIR 组较对照组 Ki-67、Bcl-2 表达减少， Caspase-3、BAX 表达增加； TUNEL 结果显示， siHOTAIR 组较空白对照组肿瘤细胞凋亡水平升高。结论干扰 HOTAIR 可以促进舌鳞癌细胞的凋亡并抑制其增殖， HOTAIR 可以作为舌鳞癌治疗的研究方向。

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应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因

赵秀娟陈万标张沛涛楚晓文张娜楚晓文白向阳杨冰吴旭东王玺

2016, 44 (10): 1190-1194. doi: 10.11958/20160731

摘要 ( 924 )

PDF(548KB) ( 4416 )

目的运用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术，在人恶性横纹肌样瘤细胞株 G401 中敲除 p21 基因。方法通过反转录定量 PCR（RT-qPCR）及 Western blot 检测各瘤细胞株中 p21 的表达，针对 p21 基因作用的功能域，设计了靶向人 p21 基因第 3 个外显子的向导 RNA（sgRNA），克隆入 lentiCRISPR v2 载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在 293T 工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染 G401 细胞，使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选，显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得 G401 单克隆细胞株。提取单克隆细胞株 RNA 及蛋白，利用 RT-qPCR 及 Western blot 方法检测细胞株中 p21 的敲除效果。结果 p21 在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向 p21 基因的 lentiCRISPR v2-sgRNA 重组慢病毒质粒。与对照组相比，筛选得到的 G401 亚克隆细胞系中 p21 蛋白表达缺失。结论针对难转染的 G401 细胞，应用 CRISPR/Cas9 系统成功构建了 p21 基因敲除的稳定株，为后续深入研究 p21 在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。

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针对人 DNAH2 蛋白的鼠源单克隆抗体的制备

常丽贤章婧嫽任媛媛孙聪聪万扬安文彬张英驰袁卫平竺晓凡

2016, 44 (10): 1195-1198. doi: 10.11958/20160317

摘要 ( 988 )

PDF(507KB) ( 3874 )

目的制备特异性的鼠源单克隆抗 DNAH2（Homo sapiens dynein， axonemal， heavy chain 2）抗体。方法首先针对人 DNAH2 蛋白 N 端 1~300 aa 序列，构建可表达 His 标签的免疫原融合表达质粒，在大肠杆菌内以 IPTG 诱导 His-免疫原的表达并纯化；然后免疫 BALB/c 小鼠，分离出脾淋巴细胞，并与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞；最后以酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白免疫印迹法（Western blot）筛选阳性杂交瘤细胞。结果利用 IPTG 有效诱导了大肠杆菌内 DNAH2 免疫原的表达；筛选的阳性杂交瘤细胞检测出 DNAH2 蛋白条带。结论成功制备针对人 DNAH2 蛋白的鼠源单克隆抗体。

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右旋-色氨酸对变异链球菌生物膜形成及离散的影响

杨晓月廖晓辉叶静邵灿王斌刘颖

2016, 44 (10): 1199-1203. doi: 10.11958/20160341

摘要 ( 1072 )

PDF(692KB) ( 3791 )

目的探讨右旋-色氨酸（D-Trp）对变异链球菌（S. mutans）生物膜形成及离散的影响，以及在 D-Trp 作用下 S. mutans 对氯己定（CHX）药物敏感性的变化。方法吸光度法检测 5.0 mmol/L D-Trp 对悬浮 S. mutans 生长的影响，非处理组不作 D-Trp 处理；结晶紫染色法检测 1.0、2.5 及 5.0 mmol/L D-Trp 处理组 S. mutans 生物膜形成的变化，非处理组不添加 D-Trp；结晶紫染色法及激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）观察 1.0、2.5 及 5.0 mmol/L D-Trp 处理组对 24 h S. mutans 生物膜的离散作用；刃天青钠盐指示法检测 5.0 mmol/L D-Trp 处理（实验组）和阴性对照组的最小抑菌浓度（MIC）及最小生物膜抑菌浓度（MBIC）。结果单菌种悬浮 S. mutans 在 D-Trp 处理组与非处理组的作用下， 28 h 内生长趋势一致，均从 4 h 开始进入对数期， 22 h 到达平台期。 1.0、2.5 及 5.0 mmol/L D-Trp 处理组与非处理组相比， S. mutans 生物膜在 0~72 h 内生物膜生物量均随时间推移而增加；同一时间点，各处理组各时点生物膜生物量均低于非处理组（P＜ 0.05）。结晶紫染色法示 1.0、2.5 及 5.0 mmol/L D-Trp 处理组生物膜生物量（OD570）均低于非处理组（P＜ 0.01）。激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示， 1.0、2.5 及 5.0 mmol/L D-Trp 处理组均有细菌黏附于介质表面，处理组生物膜生物量低于非处理组（P＜ 0.01）。实验组和阴性对照组对 S. mutans 的 MIC 均为 0.073 mg/L，对 S. mutans 的 MBIC 分别为 0.293 mg/L 和 2.344 mg/L，添加 5.0 mmol/L D-Trp 后，CHX 对 S. mutans 的 MBIC 降至 1/8。结论 D-Trp 能够抑制生物膜形成，促进已形成生物膜离散，并提高 S. mutans 对 CHX 的敏感性。

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鮑氏志贺菌临床分离株的毒力基因检测及分子分型

孙阳，张豪杰，郭文学，王哲，贾宇驰，祁伟

2016, 44 (10): 1204-1208. doi: 10.11958/20160440

摘要 ( 1018 )

PDF(403KB) ( 3851 )

目的了解鲍氏志贺菌临床分离株毒力基因分布、耐药性、分子分型及菌株间流行病学相关性。方法从我院 2015 年 6 月—10 月间门诊就诊腹泻病患者的粪便中分离收集 9 株鲍氏志贺菌。采用 K-B 纸片扩散法行抗生素药敏试验，聚合酶链反应技术检测毒力基因，脉冲场凝胶电泳技术及多位点序列分型确定分子分型，分析菌株间流行病学相关性。结果 9 株鲍氏志贺菌共分为 3 个血清亚型： Ⅰ 型 1 株， Ⅱ 型 3 株， Ⅳ型 5 株。 9 株菌均为多重耐药菌：对氨苄西林耐药率为 9/9，对头孢他啶、链霉素、庆大霉素、复方新诺明、头孢噻肟、头孢曲松、四环素、诺氟沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为 1/9、4/9、4/9、4/9、5/9、5/9、6/9、6/9、6/9，未发现阿米卡星、头孢哌酮-舒巴坦和亚胺培南耐药株； ipaH 的检出率为 100%， sen、set1A、set1B、ial、virA、icsA、sigA 的检出率均为 0， pic、sepA、sat 的检出率分别为 4/9、5/9、7/9； 9 株鲍氏志贺菌通过脉冲场凝胶电泳共分为 8 种谱型，相似性在 63.21%~100%。多位点序列分析结果显示 6 株为 ST648， 2 株为 ST131、1 株为 ST10。结论本院分离的 9 株鲍氏志贺菌共分 3 个血清亚型，多重耐药情况严重，菌株间亲缘关系相对较远，属非暴发病例。

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VEGF165在恒河猴骨髓间充质干细胞中的表达及鉴定

郭再玉，张合亮，水涛，张国哲，赵卫华，陈谦，侯延伟

2016, 44 (10): 1209-1212. doi: 10.11958/20160444

摘要 ( 573 )

PDF(487KB) ( 3789 )

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF165）转染恒河猴间充质干细胞（MSCs）后的表达情况，以及转染后对 MSCs 功能的影响。方法通过 Ficoll 法分离并培养恒河猴骨髓 MSCs，进行细胞表型鉴定。转染 pcDNA-eGFPVEGF165至 MSCs，荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白（eGFP）表达情况，同时流式细胞技术对转染成功的细胞进行细胞表型及 eGFP 表达鉴定， RT-PCR 法检测转染后 VEGF165表达情况。结果成功分离到纯度较高的 MSCs，转染后的 MSCs 及子代细胞均有 eGFP 和 VEGF165 的表达，且保留了 MSCs 的特性。结论 VEGF165 基因转染 MSCs 后可以稳定表达外源基因，且可以维持 MSCs 的特性。

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原核移植技术对子代小鼠脑组织mRNA表达谱的影响

李天杰曹延祥金小虎赵红翠于洋乔杰

2016, 44 (10): 1213-1216. doi: 10.11958/20160746

摘要 ( 829 )

PDF(717KB) ( 4178 )

目的探讨原核移植（PNT）技术对子代小鼠脑组织 mRNA 表达谱的影响。方法将 SPF 级 ICR（CD-1）雌鼠超促排卵并与雄鼠交配受精后，收集雌鼠受精卵进行原核移植，获得重构胚胎，将其移植到假孕小鼠输卵管内获得原核移植子代小鼠（PNT 组），未经原核移植操作的受精卵经过胚胎移植后获得子代小鼠（对照组）。提取 2 组小鼠脑组织 RNA，逆转录为 cDNA 后荧光染料标记，利用 Agilent 小鼠 mRNA 芯片检测 2 组 mRNA 表达谱差异，筛选差异表达的 mRNA 并进行 GO 和信号通路分析。结果 PNT 组与对照组表达差异倍数在 2 倍以上的 mRNAs 有 392 个，占所有 mRNAs 的 1.7%，其中 366 个表达升高， 26 个表达降低；表达差异倍数在 4 倍以上的共 11 个。上述差异表达的 mRNAs 经 GO 分析结果显示靶基因富集于 mRNA 可变剪接、小 GTP 酶介导的信号转导、胰岛素受体信号通路调节等生物学过程以及水解酶活性、跨膜转运蛋白活性、焦磷酸酶活性等分子功能。信号通路富集分析结果显示靶基因集中在离子通道转运、脂肪酸代谢、丁酸甲酯代谢、三酰甘油和酮体代谢等信号通路。结论原核移植可能会对小鼠脑组织一些关键代谢过程产生影响。

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miR-34a改变自噬通路AMPK/mTOR的活性在心肌细胞肥大中的作用

黄炯华林育辉戴文军伍金雷谢文杰陈永权

2016, 44 (10): 1217-1220. doi: 10.11958/20160435

摘要 ( 1112 )

PDF(609KB) ( 3730 )

目的研究 miR-34a 与自噬通路磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶点（mTOR）在血管紧张素（Ang）Ⅱ 诱导的原代大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法体外培养原代大鼠心肌细胞，分成 3 组：阴性对照慢病毒（NC）组、AngⅡ 刺激+阴性对照慢病毒（AngⅡ +NC）组、AngⅡ 刺激+miR-34a 过表达慢病毒（AngⅡ +miR-34a）组。激光共聚焦检测心肌细胞肥大变化；利用荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测 miR-34a、心房钠尿肽（ANP）和 β- 肌球蛋白重链（β-MHC）表达；利用蛋白印迹（Western blot）测定 AMPK/mTOR 信号通路的活性变化。结果与 NC 组比较， AngⅡ +NC 组心肌细胞表面积明显增大（P＜ 0.05）；与 AngⅡ +NC 组比较， AngⅡ +miR-34a 组心肌细胞表面积减少（P＜ 0.05）。与 NC 组比较， AngⅡ +NC 组的 miR-34a 表达下调， ANP 和 β-MHC 表达上调（均 P＜ 0.05）；而与 AngⅡ +NC 组比较， AngⅡ +miR-34a 组的 miR-34a 表达上调， ANP 和 β-MHC 表达下调（均 P＜ 0.05）。与 NC 组比较， AngⅡ +NC 组 p-AMPK/AMPK 增加， p-mTOR/mTOR 减少（均 P＜ 0.05）；与 AngⅡ +NC 组比较， AngⅡ +miR-34a 组 p-AMPK/AMPK 减少， p-mTOR/mTOR 增加（均 P＜ 0.05）。结论 miR-34a 能抑制 AngⅡ 诱导的心肌细胞肥大，其作用部分是通过改变 AMPK/mTOR 的活性来实现的。

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香叶醇对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生的抑制作用

江金垚徐西子

2016, 44 (10): 1221-1224. doi: 10.11958/20160290

摘要 ( 1139 )

PDF(571KB) ( 3685 )

目的研究香叶醇对球囊损伤大鼠颈动脉损伤后血管内膜新生的影响及可能的机制。方法 20 只雄性成年 SD 大鼠，随机均分为 4 组。（1）假手术组：不予以球囊损伤。（2）对照组：予以球囊损伤，不予以药物干预。（3）低浓度组：球囊损伤后每日口服香叶醇 50 mg/kg。（4）高浓度组：球囊损伤后每日口服香叶醇 200 mg/kg。制作球囊损伤模型， 2 周后留取球囊损伤段血管制作病理切片，苏木精-伊红（HE）染色法测量内膜与中膜（I/M）比值，免疫组化法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，用积分光密度（IOD）值表示，并测定组织中氧化应激标志物 8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）和脂质氧化产物丙二醛（MDA）的水平。结果与假手术组比较，对照组 I/M 比值、IOD 值、8-OHdG 及 MDA 水平均升高；与对照组比较，低浓度组 I/M 比值、IOD 值、8-OHdG 均降低，但 MDA 水平与对照组差异无统计学意义。高浓度组与对照组比较 I/M 比值、IOD 值、8-OHdG 及 MDA 水平均降低，且较低浓度降低更明显（P < O.05）。结论香叶醇抑制大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生，其机制可能与下调 PCNA 蛋白表达，抑制活性氧的产生有关。

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浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳化痰平喘活性研究

王翰华杨晓春崔明超

2016, 44 (10): 1225-1228. doi: 10.11958/20160345

摘要 ( 1615 )

PDF(382KB) ( 3952 )

目的考察浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳、化痰及平喘活性。方法分别采用小鼠氨水引咳法和豚鼠枸橼酸引咳法研究浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳活性；小鼠气管酚红排泌法研究化痰活性；豚鼠整体动物引喘法研究平喘活性。结果浙贝母叶醇提物可明显延长小鼠和豚鼠的咳嗽潜伏期并减少咳嗽次数，显著增加小鼠呼吸道黏膜酚红的排泌量，显著延长豚鼠哮喘潜伏期（均 P＜ 0.05）；浙贝母花醇提物可明显延长小鼠和豚鼠的咳嗽潜伏期并减少咳嗽次数，显著增加小鼠呼吸道黏膜酚红的排泌量（均 P＜ 0.05），但不能延长豚鼠哮喘潜伏期（P＞ 0.05）。结论浙贝母叶醇提物具有明显的止咳、化痰及平喘活性；浙贝母花醇提物具有明显的止咳、化痰活性，但现有剂量下，没有平喘活性。

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医用气源汲送装置复制呼吸衰竭犬模型的可行性研究

王合荣孙昕吴琦付莎莎

2016, 44 (10): 1229-1232. doi: 10.11958/20160029

摘要 ( 778 )

PDF(378KB) ( 3704 )

目的探讨医用气源汲送装置复制呼吸衰竭犬模型的可行性及稳定性。方法以犬为研究对象，采用自行设计的气源汲送装置，通过调控吸入氧气（O2）、二氧化碳（CO2）和氮气（N2）的比例，降低吸入氧气浓度（FiO2）和（或）提高吸入 CO2浓度（FiCO2），同时开放呼出气通路的方法，使犬动脉血氧分压［p（O2）］和动脉血二氧化碳分压［p（CO2）］达到并稳定在某一设定状态。分别在基础状态及造模后 1 h 和 2 h 时采集动脉血，检测相关血气指标。结果造模 1 h 后，实验动物 p（O2）＜ 60 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）、p（CO2）＞ 50 mmHg，呼吸衰竭犬模型建立成功。造模 1 h 和 2 h 时酸碱度（pH）值、血氧含量、动脉血氧饱和度（SaO2）、碱剩余（BE）较基础状态降低， p（CO2）、二氧化碳总量（TCO2）、碳酸氢根（HCO3-）较基础状态升高（P < 0.05）。造模 2 h 时 p（O2）、血氧含量、 SaO2较造模 1 h 降低（P < 0.05），而 pH 值、p（CO2）、TCO2、HCO3-、BE 较造模 1 h 差异无统计学意义（P > 0.05）。结论在医用气源汲送装置调控下，成功建立了大型实验动物的呼吸衰竭模型。

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缺血预适应对肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的机制研究

金涛，胡宇，刘超

2016, 44 (10): 1233-1237. doi: 10.11958/20160501

摘要 ( 843 )

PDF(332KB) ( 3789 )

目的探讨缺血预适应对肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的分子机制。方法 90 只成年清洁级 SD 大鼠随机均分为 3 组， A 组为假手术组， B、C 组建立 SD 大鼠肝脏热缺血再灌注损伤模型，并对 C 组大鼠进行缺血预适应干预。于缺血再灌注后 0、2、6、12、24 h 采集血标本测定丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST），采用酶联免疫吸附（ELISA）技术检测肝细胞中肿瘤坏死因子（TNF）-α 及白细胞介素（IL）-1β 水平；采集肝组织标本测定丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD），流式细胞仪测定肝细胞线粒体膜电位。结果 B、C 组大鼠的血清转氨酶、TNF-α、 IL-1β 及 MDA 水平均明显高于 A 组（P＜ 0.05）； B、C 组大鼠的凝血酶原活动度和胆碱酯酶低于 A 组（P＜ 0.05）； B、C 组大鼠肝脏 SOD 水平明显低于 A 组；C 组大鼠各项指标均优于 B 组（P＜ 0.05）。缺血再灌注发生后肝细胞线粒体膜电位水平在 0 h 后即达到最低值，此后呈逐渐上升趋势（P＜ 0.05），并且 C 组的肝细胞线粒体膜电位水平在各时段均高于 B 组（P＜ 0.05）。结论缺血预适应对肝细胞热缺血再灌注损伤具有一定的保护作用，缺血预适应可以通过减少炎症因子 TNF-α 及 IL-1β 的释放，提高 SOD 拮抗自由基的活性，减轻线粒体损伤等途径发挥其保护作用。

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P2X7R 拮抗剂对小鼠慢性胰腺炎的作用及机制研究

张桂贤刘大卫聂卫张一刘韦鋆刘洪斌

2016, 44 (10): 1238-1242. doi: 10.11958/20160679

摘要 ( 987 )

PDF(2020KB) ( 3906 )

目的探讨嘌呤能 P2X7 受体（P2X7R）拮抗剂——氧化三磷酸腺苷（OxATP）和亮蓝 G（BBG）在抑制下游靶蛋白——核苷酸结合寡聚化结构域样受体 3（NLRP3）炎性体活化和慢性胰腺炎（CP）胰腺纤维化进程中的作用及可能机制。方法 40 只 C57BL/6 小鼠随机均分为正常对照组、CP 模型组、OxATP 组和 BBG 组。除正常对照组腹腔注射与处理组等体积的生理盐水外，其余组均通过腹腔注射雨蛙素法制作 CP 小鼠模型（6 周）。造模结束后， CP 模型组、 OxATP 组和 BBG 组分别予以腹腔注射生理盐水、OxATP（20 μL， 300 μmol/L）和 BBG（20 μL， 10 μmol/L）处理，连续注射 2 周。然后处死各组小鼠并取胰腺组织，行病理学检查，以 HE 染色对胰腺病理组织学（炎性细胞浸润、腺泡萎缩及纤维化程度）进行评分，天狼星红染色和 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色分别对胰腺纤维化程度进行评估；免疫组化法检测胰腺 P2X7R、NLRP3 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 1（Caspase-1）中的累积光密度（IOD）值。结果与正常对照组比， CP 模型组炎症损伤组织学评分增加，胰腺纤维化程度显著增加， P2X7R、NLRP3 和 Caspase-1 免疫组化 IOD 值显著升高（P < 0.05）；与 CP 模型组相比， OxATP 和 BBG 组炎症损伤组织学评分降低， HE 染色纤维化评分、天狼星红染色和 α-SMA 免疫组化染色均显著减轻（P < 0.05），胰腺 P2X7R、NLRP3 和 Caspase-1 IOD 值均明显降低（P < 0.05）。结论 P2X7R 拮抗剂 OxATP 和 BBG 能够显著减轻 CP 小鼠模型的慢性炎症和纤维化程度，阻断 P2X7R-NLRP3 炎性体信号通路，这有望成为治疗 CP 及其纤维化进程的一种潜在新策略。

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叶酸代谢酶MTHFR、MTRR基因多态性与原因不明复发性流产的关系

谢晓媛张颖辛力冷俊宏鲁衍强薛琰朱秀兰

2016, 44 (10): 1243-1246. doi: 10.11958/20160099

摘要 ( 1428 )

PDF(343KB) ( 4675 )

目的探讨叶酸代谢相关酶亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、甲硫氨酸合酶还原酶（MTRR）基因多态性与原因不明复发性流产（URSA）之间的关系。方法采用病例对照的研究方法，选取天津医科大学总医院和天津市妇女儿童保健中心 2013 年 1 月 1 日—2015 年 3 月 1 日因 URSA 就诊的非妊娠妇女 244 例（URSA 组）和健康非妊娠妇女 116 例（对照组）。获取口腔黏膜上皮细胞，使用荧光定量 PCR 检测 MTHFR 基因 C677T、A1298C 位点和 MTRR 基因 A66G 位点的单核苷酸多态性（SNP），同时测定 MTHFR 酶活性及红细胞叶酸、血浆叶酸、血浆同型半胱氨酸水平，分析叶酸代谢相关酶 MTHFR、MTRR 基因多态性与 URSA 之间的关系。结果 URSA 组 MTHFR C677T 位点 TT 基因型频率高于对照组， CT 基因型频率低于对照组（P＜ 0.05）。 2 组间 MTHFR A1298C、MTRR A66G 基因型频率差异无统计学意义。 URSA 组 MTHFR 酶活性、红细胞叶酸、血浆叶酸水平低于对照组，同型半胱氨酸水平高于对照组（P＜ 0.05）； URSA 组中＜ 35 岁、≥35 岁患者血浆叶酸、红细胞叶酸、同型半胱氨酸水平差异无统计学意义。结论 MTHFR C677T 基因多态性与 URSA 有一定关系。

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严重急性呼吸综合征患者十年生存质量分析

华静娜，孙昕，吴琦，李莉，邢志珩，赵新骞

2016, 44 (10): 1247-1250. doi: 10.11958/20160361

摘要 ( 1212 )

PDF(336KB) ( 3693 )

目的对严重急性呼吸综合征（SARS）患者 10 年后的生存质量进行分析。方法收集确诊为 SARS 的患者 25 例为 SARS 组，健康体检者 25 例为对照组， 2 组一般资料差异无统计学意义。采用健康调查简表（SF-36）从生理机能、生理职能、躯体疼痛、一般健康状况、精力、社会功能、情感职能以及精神健康等 8 个方面对被调查者的生存质量进行评价。比较 2 组肺功能指标，包括用力肺活量（FVC）、一秒用力呼气容积（FEV1）、一秒率（FEV1/FVC）、肺总量（TLC）、残气容积（RV）、校正后一口气弥散量（TLCOc SB）及校正后弥散率（TLCOc/VA）；并分析 SARS 组各肺功能指标与生存质量各维度评分的相关性。骨 MRI 扫描检查 SARS 组患者髋关节与股骨头坏死情况。结果 SARS 组中有 23 例（92.0%）生存质量总评分差， 2 例（8.0%）生存质量总评分中等。 SARS 组较对照组各维度生存质量评分偏低（P＜ 0.01）。 SARS 组仅 TLCOc SB 低于对照组，生理机能评分与 FEV1、FEV1/FVC 呈正相关，躯体疼痛评分与 FEV1/FVC 呈正相关（P＜ 0.05），其他生存质量评分与肺功能指标间均无相关性。 SARS 组中股骨头非坏死者 14 例（56%）、坏死者 11 例（44%）。坏死组各维度生存质量仅生理机能得分低于非坏死组（P＜ 0.05）。结论 SARS 患者的生存质量低下既有心理因素也有身体因素， SARS 患者的肺通气功能和股骨头坏死影响了患者的生存质量，特别是生理机能。

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急性脑卒中患者外周血单个核细胞来源的AChE相关的microRNAs的表达变化

韩滨马晓峰张超

2016, 44 (10): 1251-1254. doi: 10.11958/20160518

摘要 ( 946 )

PDF(329KB) ( 4121 )

目的探讨急性脑卒中患者外周血单个核细胞内乙酰胆碱酯酶（AChE）相关的 microRNAs 的表达变化。方法利用 microRNAs 的预测软件并结合文献，筛选靶向 AChE 的 microRNAs。收集发病 24 h 以内的急性脑卒中患者和与之相匹配的对照组人群，留取静脉血提取单个核细胞。利用实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）技术检测 microRNAs 和 AChE mRNA 的表达，利用 Western blot 技术检测 AChE 蛋白的表达。结果预测的靶向 AChE 的 microRNAs 包括 microRNA（miR）-24、-28、-124、-132、-182*、-194、-484。与对照组相比，脑卒中患者外周血单个核细胞内 miR-24、-124、-132 和-194 表达升高（P＜ 0.05）， miR-28、-182*及-484 无明显变化， AChE mRNA 和蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论脑卒中时 miRNAs 可能通过靶向 AChE 增强胆碱能抗炎通路。

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床边检测 NT-proBNP 及 cTnI 对心源性呼吸困难的临床诊断价值

廖通，张元春,李焕轮，古振拓，潘朝庆，卢丽华，谭志伟，黄锡藩

2016, 44 (10): 1255-1258. doi: 10.11958/20160114

摘要 ( 986 )

PDF(309KB) ( 3649 )

目的探讨床边联合检测氨基末端 B 型钠尿肽原（NT-proBNP）和心肌肌钙蛋白 I（cTnI）水平对心源性呼吸困难的诊断价值。方法选取以呼吸困难为主诉入院的患者 120 例，入院时立即行床边 NT-proBNP、cTnI 检测， NT-proBNP＞ 300 ng/L 或 cTnI＞ 0.16 μg/L 定义为心源性呼吸困难。根据最后诊断将呼吸困难患者分为心源组（n= 68）和肺源组（n=52），同时选取 30 例健康体检人群作为对照组，对 3 组的 NT-proBNP、cTnI 水平进行分析。研究单独检测 NT-proBNP、cTnI 和 NT-proBNP+cTnI 联合检测诊断心源性呼吸困难的敏感度和特异度。结果肺源组及心源组的 NT-proBNP 及 cTnI 水平均高于对照组，且心源组高于肺源组（P＜ 0.01）。 NT-proBNP、cTnI 单独检测诊断心源性呼吸困难的敏感度分别为 67.65%和 52.94%；两者联合检测提高至 94.12%； NT-proBNP、cTnI 单独检测时的特异度分别为 70.00%和 53.33%，联合检测提高至 86.67%。 NT-proBNP+cTnI 联合检测的敏感度高于 NT-proBNP、 cTnI 单独检测（P＜ 0.05），检测特异度高于 cTnI 单独检测（P＜ 0.05），与 NT-proBNP 单独检测差异无统计学意义。两者联合对心源性呼吸困难诊断的阳性预测值为 94.12%（64/68），阴性预测值为 86.67%（26/30）。结论床边联合检测 NT-proBNP、cTnI 在心源性呼吸困难快速诊断中具有重要的价值，两者联合检测能够提高其诊断的敏感度。

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黄连成分与阿米卡星联合用药对多重耐药大肠埃希菌的体外活性研究

帅丽华,姜登钊,刘怀,周小娟,潘斌,叶兴文

2016, 44 (10): 1259-1262. doi: 10.11958/20160547

摘要 ( 1214 )

PDF(337KB) ( 3697 )

目的研究硫酸阿米卡星与黄连中成分黄连提取物、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀联合用药对多重耐药大肠埃希菌的体外抑制作用。方法选择 2013—2014 年间对头孢噻肟耐药的 100 株大肠埃希菌，筛选多重耐药大肠埃希菌，并采用纸片扩散确证法进行超广谱 β-内酰胺酶（ESBLs）检测。采用微量肉汤稀释法分别检测黄连提取物、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、硫酸阿米卡星对产 ESBLs 耐药大肠埃希菌的最小抑菌浓度（MIC）值，再以 ATCC 25922 为质控菌株，以棋盘式微量稀释法检测黄连提取物、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀与硫酸阿米卡星联合用药对耐药大肠埃希菌的抑菌效果，并计算联合用药的部分抑菌浓度（FIC）值。结果共筛选出 10 株产 ESBLs 耐药大肠埃希菌，黄连提取物、盐酸小檗碱与硫酸阿米卡星联合用药后对 9 株耐药菌均表现为协同或相加作用，而盐酸巴马汀与硫酸阿米卡星联合用药后对全部耐药菌均表现为协同或相加作用。结论盐酸巴马汀或盐酸小檗碱或黄连提取物与硫酸阿米卡星联合用于多重耐药大肠埃希菌感染，具有较好的应用价值，值得进一步研究。

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急性 STEMI 患者血同型半胱氨酸与 Kv1.3 通道、肌钙蛋白关系的研究

王玉岭,冯建宇，曾祥飞，杨绍兵，严宁，贾绍斌

2016, 44 (10): 1263-1267. doi: 10.11958/20160128

摘要 ( 1084 )

PDF(354KB) ( 3728 )

目的探讨急性 ST 段抬高型心肌梗死（STEMI）患者血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平与淋巴细胞电压门控性钾通道（Kv1.3 通道）、Kv1.3 通道与心肌肌钙蛋白 I（cTnI）水平的相关性。方法 80 例 STEMI 患者根据血浆 Hcy 水平分为 STEMI 合并高同型半胱氨酸血症（Hhcy）组（STEMI+Hhcy 组， Hcy >15 μmol/L， n=41）和对照组（STEMI 组， Hcy≤15 μmol/L， n=39）。抽取血标本后全自动生化仪测定 Hcy、cTnI 及血脂等指标，密度梯度离心法提取淋巴细胞，实时荧光定量 PCR 检测 Kv1.3 mRNA 表达， Western blot 检测 Kv1.3 蛋白表达。结果 STEMI+Hhcy 组 cTnI 水平高于 STEMI 组（μg/L： 22.997±5.880 vs. 12.881±6.343； P＜ 0.01）。多元线性回归分析显示年龄、性别、高血压病、糖尿病、吸烟史、家族史、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）对 Hcy 无明显影响（P＞ 0.05）。 STEMI+Hhcy 组 Kv1.3 通道 mRNA 和蛋白相对表达量（1.35±0.14 和 0.85±0.12）较 STEMI 组升高（1.00±0.07 和 0.64±0.05， P＜ 0.05）。 Hcy 水平与 Kv1.3 通道 mRNA 和蛋白表达水平呈正相关（r 分别为 0.299、0.542， P＜ 0.05）； Kv1.3 通道蛋白表达水平与 cTnI 水平呈正相关（r=0.644， P＜ 0.05）。结论 Hcy 可能对淋巴细胞 Kv1.3 通道表达起着一定的作用，导致血浆 cTnI 水平升高。

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非吸烟患者不同起搏模式对中心动脉压和动脉波增强指数的影响及意义

缪帅李广平叶岚阎哲慧

2016, 44 (10): 1268-1271. doi: 10.11958/20160530

摘要 ( 1047 )

PDF(303KB) ( 3897 )

目的探讨非吸烟患者单腔和双腔起搏对中心动脉压（CAP）和动脉波增强指数（AI）的影响及临床意义。方法入选因缓慢性心律失常入院并植入起搏器的非吸烟患者 83 例，并将其分为双腔起搏器患者 35 例（DDD 组），单腔起搏器患者 33 例（VVI 组），术后正常窦性心律者 15 例（对照组），分别测量 3 组患者的心率（HR）、CAP、AI、外周收缩压（SBP）、外周舒张压（DBP）等指标，然后对 DDD 组患者的起搏器进行程控，将 DDD 模式程控成 VVI 模式，待患者心率稳定后测量以上指标。结果 3 组患者一般情况和实验室指标比较差异均无统计学意义。 VVI 组左心房直径大于对照组（P＜ 0.05）； DDD 组 CAP 明显高于对照组和 VVI 组（P＜ 0.05）； DDD 组 AI、校正 AI（AIC）和外周血压均高于 VVI 组（P＜ 0.05）； VVI 组 CAP 和外周血压明显低于对照组（P＜ 0.05），而对于 AI 和 AIC与对照组比较差异无统计学意义； DDD 组程控后的 CAP、AI 和外周动脉血压水平均低于程控前（P＜ 0.05）。结论在非吸烟患者中双腔起搏模式会明显升高 CAP 和 AI。

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血栓抽吸在急性STEMI患者PPCI术中的应用研究

李振龙王玉平张彤王媛媛马洪俊刘寅

2016, 44 (10): 1272-1275. doi: 10.11958/20160343

摘要 ( 848 )

PDF(308KB) ( 3813 )

目的评估急性 ST 段抬高心肌梗死（STEMI）患者直接经皮冠状动脉介入治疗（PPCI）中应用血栓抽吸（TA）对术后 TIMI 血流、左室收缩功能和临床预后的影响。方法回顾天津市胸科医院心内科 2013 年 1 月—2015 年 3 月连续收治的 STEMI 并行 PPCI 的患者 664 例，根据术中是否应用血栓抽吸，分为抽吸组和对照组。 2 组临床基线情况、冠状动脉造影（CAG）病变情况及 PPCI 相关指标差异均无统计学意义。术后随访 12 个月，评价 1 个月及 12 个月时血栓抽吸对术后 TIMI 血流、左室收缩功能及预后的影响。结果抽吸组术后 TIMI 血流、术后 1 周左室射血分数均高于对照组（P＜ 0.05）。随访 1 个月时 2 组各主要不良心脏事件（MACE）及总 MACE 发生率比较差异无统计学意义。 12 个月时 2 组心源性死亡、再发心肌梗死、新发或加重心力衰竭发生率比较差异无统计学意义，抽吸组再发心绞痛、总 MACE 发生率低于对照组。抽吸组无 MACE 生存情况优于对照组。结论 STEMI 患者 PPCI 术中应用血栓抽吸可以进一步改善术后 TIMI 血流和左室收缩功能，减少术后 12 个月内再发心绞痛的发作，但对其他 MACE 无明显获益。

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微创 McKeown 食管癌切除术行喉返神经旁淋巴结清扫的临床效果探讨

薛亚斌，吕红博，杜同心，孙伟

2016, 44 (10): 1276-1279. doi: 10.11958/20160351

摘要 ( 1227 )

PDF(292KB) ( 3758 )

目的探讨微创 McKeown 食管癌切除术行喉返神经旁淋巴结清扫的可行性、安全性。方法回顾性分析新疆医科大学附属肿瘤医院行微创 McKeown 食管癌切除术的食管鳞癌患者 163 例，依术式的不同分为常规组 63 例、右侧喉返神经旁淋巴结清扫组（右侧组）53 例、双侧喉返神经旁淋巴结清扫组（双侧组）47 例。比较各组患者术后病理情况、手术时间、术中出血量、术后住院时长、淋巴结清扫数及肺炎、吻合口瘘、喉返神经损伤等并发症情况。病理情况包括肿瘤部位、病理分化程度、T 分期以及病理分期。术后并发症随访至术后 6 个月。结果常规组、右侧组、双侧组的肿瘤部位、病理分化程度、T 分期以及病理分期差异均无统计学意义。常规组出血量大于右侧组和双侧组（P＜ 0.05），右侧组与双侧组出血量差异无统计学意义；常规组、右侧组及双侧组的总淋巴结清扫数及胸腔淋巴结清扫数依次升高，组间多重比较差异均有统计学意义（P＜ 0.05）；而其他组间手术情况及术后并发症差异均无统计学意义。结论微创 McKeown 食管癌切除术行双侧喉返神经旁淋巴结清扫具有较好的安全性及可行性。

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孕产妇不同分娩方式的选择及结局探讨

庞运夺，马艳，董胜雯，孙忠

2016, 44 (10): 1280-1282. doi: 10.11958/20160033

摘要 ( 978 )

PDF(264KB) ( 4206 )

目的调查初产妇及经产妇不同情况下分娩方式的选择，并对其分娩结局进行交叉比较。方法回顾性分析天津医科大学总医院妇产科 2013 年 1 月 1 日—2014 年 12 月 31 日入院分娩产妇 7 509 例的临床资料，其中初产妇 6 229 例，经产妇 1 280 例。统计初产妇和经产妇阴道分娩和剖宫产例数及经产妇中剖宫产者的剖宫产指征构成比，比较初产妇及瘢痕子宫孕产妇再次妊娠选择阴道分娩与剖宫产的比例及结局。结果经产妇剖宫产率高于初产妇（69.06% vs. 57.54%， χ2=59.19， P＜ 0.05）。其中瘢痕子宫妇女再次妊娠 631 例，经阴道分娩 39 例（6.18%），再次剖宫产 592 例（93.82%）。经产妇选择剖宫产的手术指征以瘢痕子宫为主。初产妇及瘢痕子宫孕产妇选择阴道分娩结局与剖宫产相比新生儿体质量较轻，孕产妇住院时间较短，产后 24 h 出血量和产后发热例数均较少（均 P＜ 0.05），在新儿评分方面差异无统计学意义。初产妇与瘢痕子宫孕产妇选择阴道分娩结局差异无统计学意义。瘢痕子宫经产妇再次剖宫产与初产妇首次剖宫产相比，会增加孕产妇产后 24 h 出血量和产后发热例数（P＜ 0.05）。结论经产妇再次分娩仍以剖宫产为主；瘢痕子宫经产妇再次妊娠经阴道分娩的结局明显优于首次和再次剖宫产者，经阴道分娩是孕产妇较为安全的分娩方式。

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成人下颌骨髁突骨折手术治疗32例临床分析

严颖彬，穆洁，张兰成，刘浩，王志兴，张军，沈军，张萍

2016, 44 (10): 1283-1286. doi: 10.11958/20160606

摘要 ( 1164 )

PDF(1264KB) ( 4035 )

目的探讨包括囊内骨折在内的成人下颌骨髁突骨折的手术疗效。方法 32 例 33 侧髁突骨折中，囊内骨折 6 例，采用耳前入路和 2 枚 18 mm 的长螺钉固定；髁颈骨折 6 例 7 侧，采用颌后穿腮腺入路及 1 块小型板固定；髁颈下骨折 20 例，采用环下颌角入路和 2 块接骨板固定。结果术后平均随访 13.5 个月，随访期末平均最大张口度 37.5 mm。 32 例患者均获得良好的咬合关系和面部对称性。 7 例（21.9%）出现暂时性面神经瘫痪，术后 3 个月均完全恢复， 1 例出现涎漏，加压包扎后痊愈。无永久性面瘫、髁头吸收等严重并发症。结论对不同类型的髁突骨折采用适宜的手术入路和内固定方法是取得良好手术效果的关键。

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microRNAs与腹膜纤维化的研究进展

李栋闫铁昆

2016, 44 (10): 1287-1290. doi: 10.11958/20160541

摘要 ( 812 )

PDF(331KB) ( 3809 )

近年发现微小 RNA（miRNAs）是转录后基因调控的关键因素，参与诸多疾病的发生、发展。腹膜透析是终末期肾脏疾病的主要替代治疗方法之一，腹膜纤维化是导致腹透患者退出腹透治疗的最主要因素，制约了腹膜透析的应用和发展。 miRNAs 与腹膜纤维化发生密切相关。本文就 miRNAs 在腹膜纤维化发病机制及治疗中的作用进行综述。

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抗-S抗体导致疑难配血一例

魏晓娟王维刘晨梅

2016, 44 (10): 1291-1292. doi: 10.11958/20160305

摘要 ( 1027 )

PDF(256KB) ( 3744 )

抗-S 抗体是 MNS 血型系统中少见的不规则抗体。笔者在工作中发现 1 例冠心病患者在行冠脉搭桥术前经不规则抗筛查呈阳性。经过检测确认患者血清中含有 IgG 型抗-S 抗体，为本实验室首次发现。因此在输血前必须进行抗体筛查，并行不规则抗体鉴定，以避免输血不良反应的发生。

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脂肪瘤性血管外皮细胞瘤一例

董丽儒，任会强，王珊，宋旭东

2016, 44 (10): 1293-1294. doi: 10.11958/20160339

摘要 ( 887 )

PDF(1104KB) ( 3809 )

脂肪瘤性血管外皮细胞瘤（LHPC）是一种罕见的软组织肿瘤，生长缓慢，好发于深部软组织，其经典形态学特点是圆形至梭形的未分化细胞围绕薄壁分支状血管生长。本文通过回顾性分析 1 例 LHPC 的临床病理特征，以期加强对 LHPC 的认识。

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肛管恶性黑色素瘤一例

刘经州

2016, 44 (10): 1295-1296. doi: 10.11958/20160415

摘要 ( 792 )

PDF(1085KB) ( 3763 )

肛管恶性黑色素瘤临床罕见、恶性程度高、预后差。本文回顾了 1 例肛管恶性黑色素瘤患者的诊疗经过并复习了该病诊断及治疗的相关文献资料。

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